磁刺激对小鼠原代海马神经元突触形态、突触蛋白及其BDNF-TrkB信号通路表达的影响.pdf

中文摘要 维甲酸受体Gt在全反式维甲酸调节血管平滑肌细胞KLF4表达 中的作用及机制研究 摘 要 factor 4，KLF4)是一种含有 目的：Krnppel样因子4(Kmppel．1ike 锌指结构的转录因子，在多种组织和细胞中广泛存在。在不同细胞内环境 中，KLF4作为一种基础转录因子，可激活或抑制多种基因的转录并调节 包括增殖、分化、发育、炎症和凋亡在内的多种细胞生物学过程。因此， KLF4基因的表达调节和功能改变是影响细胞生物学行为的重要因素之 一。前期的研究表明，KLF4基因功能的调节是复杂的网络调节过程，既 可以通过转录水平进行调节，又可以通过转录后翻译修饰水平调节，后者 包括磷酸化、乙酰化、苏素化及泛素化等过程的调节。此外，大量实验证 据表明，多种刺激因素均可影响细胞内KLF4的水平，如血清饥饿、氧化 factor-BB， 应激、血小板衍生生长因子．BB(platelet．derivedgrowth growth adenosine factor-13，TGF．p)、干扰素小环腺苷酸(cyclic retinoic cAMP)和全反式维甲酸(all—trans smoothmuscle 修饰，进而转录激活血管平滑肌细胞(vascular cell，VSMC) 分化标志基因SM22仅和SM0【．actin并促进VSMC向分化表型转化。此外， factor Owens等人发现转录因子激活蛋白，1(transcriptionstimulating 可通过自调控方式调节Klf4基因转录。 ATRA是膳食摄入维生素A的代谢产物，可通过结合其胞内核受体 acid 靶基因启动子区的维甲酸应答元件(retinoic response 直接结合而调控靶基因的转录。未结合配体的RAR往往与辅抑制子构成 转录抑制复合体而使基因沉默；结合配体后，RAR募集一系列辅转录激 活因子从而激活下游基因的转录。此外，RAR还可通过与其他转录因子 中文摘要 作用。目前，RAR被认为是治疗VSMC增殖性疾病的重要靶分子。在临 床治疗中，ATRA已经成功的运用于白血病、癌症及动脉再狭窄和斑块形 成等疾病的治疗。然而，ATRA诱导Klf4基因表达的分子机制目前仍不 十分清楚。 中的作用及其分子机制。 方法：细胞培养，腺病毒及质粒载体的构建，定点突变，小干扰RNA 环肽细胞骨架染色等。 结果： 1RARa介导ATRA诱导的Klf4基因表达 因表达。结果如下： 1．1ATRA以浓度和时间依赖性方式诱导KLF4和RAR(I表达 表达之间的关系，我们首先应用Western印迹分析方法检测不同浓度 然而，ATRA刺激后，RARl3和RAIⅥ表达水平无显著变化。 1．2RA_R0t介导ATRA诱导的Klf4基因表达 为了进一步探寻介导ATRA诱导Klf4基因转录的核受体，我们应用 的表达。结果显示，在敲低内源性砒讯0【的细胞中，ATRA对Klf4表达 的诱导作用受到显著抑制。用RAR(t选择性抑制剂Ro 0【