O型Asia1型FMDV衣壳蛋白嵌合体在杆状病毒表达系统中的表达及其免疫原性的分析.docVIP

摘要 FMDV属于小核糖核酸（Ribonucleic Acid，RNA）病毒科(picornaviridae)，口蹄疫病毒属(aphthovirus)，口蹄疫病毒能够使大部分偶蹄动物感染、发病，并且能够在大范围内快速传播的烈性传染病，是世界范围内影响经济发展的重要动物疾病。FMDV的基因组为一条由60个重复呈20面体的衣壳蛋白包裹的单股正链RNA，全长约8500nt，衣壳蛋白由结构基因VP1，VP2，VP3，和VP4组成。暴露在衣壳表面的蛋白对病毒的抗原性起到决定作用。Bac-to-Bac BmNPV的宿主只有家蚕，在室内饲养，进化了几千年。与其它的有脊椎动物的病毒相比BmNPV是安全的。在多角体中增加外源蛋白的比例，找到的用多角体蛋白表达外源蛋白。 使用特异性引物通过融合PCR（Fusion PCR）扩增同时含有Asia1型和O型编码衣壳蛋白区域的基因。然后将鉴定正确的基因克隆至供体质粒pFastBacDual。将酶切和测序鉴定正确的重组质粒pFastBacDual转化至大肠杆菌DH10BAC感受态细胞进行蓝白斑筛选。使用cellfectinⅡreagent转染试剂，将PCR鉴定正确的重组杆粒转染Sf9细胞。用重组杆状病毒感染Sf9细胞的方法扩增病毒，用扩增的病毒感染细胞，在感染72h后收获细胞，表达的目的蛋白经Western blotting检测、双抗体夹心ELISA检测。 W