产肠毒素性大肠杆菌ST-LTB融合蛋白不同佐剂纳米疫苗的筛选 其免疫原性的研究.pdfVIP

摘 要 本文以明胶、PEG-400 、卵磷脂、胆固醇、大豆油、壳聚糖等作为载体材料，辅以蜂胶、卡 波姆、span-60 与 tween-80 等佐剂或表面活性剂，采用纳米技术制备了六种不同佐剂配方的载产 肠毒素性大肠杆菌肠毒素 ST-LTB 基因工程融合蛋白的纳米疫苗，在此基础上对其进行了免疫原 性研究，为制备有效预防 ETEC 的新型疫苗提供了理论依据。主要研究结果如下： (1)应用IPTG诱导大肠杆菌ST-LTB融合基因表达，并对最优的诱导表达条件进行了筛选， 获取了大量包涵体蛋白并进行了纯化。SDS结果表明，所获得的包涵体蛋白纯度满足要求， 可以作为免疫抗原使用。 (2)利用超声破碎法及卡波姆、span-60、tween-80等表面活性剂的活化作用，将纯化的ST-LTB 蛋白包裹入适量的纳米佐剂材料中，制备了明胶复合佐剂、大豆油复合佐剂、卵磷脂复合佐剂、 PEG-400复合佐剂（无蜂胶）、PEG-400复合佐剂（含蜂胶）、壳聚糖复合佐剂六种候选纳米疫苗， 所得产物分属于纳米球、纳米脂质体和纳米乳液三种纳米体系。采用考马斯亮蓝G-250法和透射 电镜法，对六种纳米疫苗的载药率、包封率和粒径等主要工艺指标进行了测定。结果表明，载药 率依次为84.88