秦艽组织培养形态发生.pdfVIP

秦艽组织培养及形态发生研究 黄馨慧 摘要：秦艽是我国传统常用中药，性苦、辛、平，微寒。现代药理研究表 明秦艽具有抗风湿、解热、镇痛、降压、抗菌等多种功效。本实验以秦艽(Gentiana macrophylla Pall．)叶片、胚轴为材料，较系统的研究秦艽组织培养与快速 繁殖技术，通过胚胎发生途径建立其植株再生体系，并对胚状体发生过程从形 态学、组织学等方面进行了研究，对应用生物技术繁育秦艽优良种苗具有一定 的意义。 (一)愈伤组织培养：在附加一定浓度的BA和NAA的MS培养基上经过2 周以上的培养，95％以上的秦艽叶片和胚轴外植体可产生绿色愈伤组织。这些愈 上。暗培养对秦艽愈伤组织的诱导和增殖没有明显影响，但可以减缓愈伤组织老 化；与其他植物生长调节剂相比，NAA对秦艽愈伤组织的形成有显著影响。 (二)无菌苗的增殖培养：无菌苗在含1 mg·L’1NAA和1mg-L。BA的生长 培养基上培养4周后，幼苗的高度可增长4．30倍，20％的幼苗可形成丛生芽，4 周内芽增殖倍数为2～3倍。 (三)不定根的诱导：下胚轴、幼叶和不定根在附加3 NAA+0．1 mg·Lo BA的培养基上培养4周后，形成白色、粗短、表面有细小绒毛的不定根， mg·L．1 这些不定根可用于愈伤组织和胚状体的诱导。 (四)胚胎发生：由胚轴诱导产生的淡绿色、生长迅速的愈伤组织在含NAA 和2，4一D的培养基上培养4周后可形成黄白色疏松易碎的胚性愈伤组织。这些 愈伤组织在附加NAA和2，4一D为0．5 mg·一或2mg·r的Ms培养基上培养4周后 的增殖倍数可达4．5倍以上，并且能较好的保持胚状体的发生能力。胚性愈伤 组织在含O．5 mg·一2，4一D和0．5 mg·L“NAA的培养基上培养4周后发生胚状体。 大约66．7％的球形胚在附加0．5 f【lg·一BA和0．5 mgtLlNAA的MS培养基上可发 育成具子叶的胚状体，在不含植物生长调节剂的Ms培养基上90％的具子叶的胚 状体可萌发形成完整再生植株。 (五)影响胚胎发生的因素：(1)外植体的影响。秦艽叶片、胚轴、不定 根和愈伤组织都能通过阳J接途径诱导胚状体的发生，以叶片为外植体诱导胚状 体，在一次培养中通过间接途径形成的胚状体，形态变化大，畸形胚多，愈伤 组织化严重；以胚轴作为外植体，先诱导愈伤组织，转接后诱导形成的『F常胚 状体多，并且形态较均匀；不定根可以通过直接途径诱导胚状体的发生，但是 产生的胚状体多为畸形。(2)植物生长调节剂的影响。NAA对胚性愈伤组织、 体细胞胚的诱导等都有促进作用，高浓度的BA明显抑制体细胞胚的形成；附 加0．5 mg-l。NAA和0．5mg·l～2,4．D的MS培养基可使27．8％的愈伤组织发生正 常的胚状体；含2 1 体；含3 NAA配合0 mg·L。1 mg·L。BA的培养基可使13％的不定根形成胚性 愈伤组织，进一步培养可形成胚状体和完整再生植株。(3)球形胚状体的来源 影响胚状体成熟。在含3mg-l～NAA+3mg·l。IBA+1mg·l。KT的MS培养基上 诱导产生的胚状体比在附加o．5 BA+4NAA+0．3KT的MS mg·10 mg·l‘1 mg·l’1 培养基上诱导产生的胚状体能更好的发育成正常的具子叶的胚状体。 (六)组织学观察：通过连续石蜡切片观察胚状体的形成过程，结果发现 秦艽胚状体的发育过程与合子胚的发育过程相似，经原胚、球形胚、心形胚、 鱼雷胚发育成具子叶的胚状体。根据观察结果推测秦艽胚状体的起源为单细胞 起源。 (七