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HLA-B27基因亚型及其相关疾病 综 述 1 HLA-B27分子及其基因亚型 1.1 HLA-B27分子结构 HLA抗原是人类主要组织相容性复合体(Major histocompatibility Complex．MHC)的表达产物，在免疫系统中主要负责细胞之间的相互识别和诱导免疫反应，调节免疫应答的功能[1]。 HLA—B27分子，属于主要组织相容性复合体I(MHC I)类分子，结构类同其他MHC 1分子，由两条多肽链组成，一条α链或重链，分子量约为44×103，包括αl、α2、和α3三个结构域；另一条β链或轻链即αp2微球蛋白(分子量约12×103)，二者结合共同组成B27分子，其相对分子量约56×103。HLA一B27重链分子为一种穿膜蛋白[2]，分为三部分：①胞外区，含α1、α2和α3三个结构域，分别由1—90、90一182、182—274位氨基酸组成；②跨膜区，由274—313位氨基酸组成；③胞内区，有B*313—338位氨基酸组成，起信号传导作用。α1和α2构成一个抗原结构凹槽，在凹槽中有A、B、C、D、E、F共6个袋状结构，分别容纳结合抗原肽的P2、P3、P7、P8位氨基酸残基和两个末端残基深入的侧链，从而固定抗原肽与B27分子的结合。 1.2 HLA-B27基因及其亚型分布 HLA—B27基因是HLA—I类分子B位点上的等位基因，，相对分子量约56 kda，位于人的第六号染色体的短臂上，6P21，31，由6个外显子和7个内含子组成，编码分子量为44×103的糖蛋白。HLA—B27等位基因呈多态性，它们之间仅是一个或数个氨基酸的差别，且主要集中在αl、α2结构区内。近年随着HLA一B27分型技术提高，不断有新的HLA—B27等位基因发现。到2002年WHO正式命名的HLA—B27等位基因达到了24个，即B*2701一B*2725，其中不包括B*2722等位基因在内(研究表明，B*2722与B*2706亚型具有相同的基因序列，因此在2002年4月B*2722作为一个正式的WHO等位基因被删除，以致在B*2701到B*2725这一组等位基因中出现了裂孔现象) [2,3]。目前被正式命名的就有37多个，各亚型氨基酸的改变主要集中发生在11个位点上。 HLA一B27等位基因在不同的种族和人种中的分布和流行情况大相径庭。其中B*2702在中东、北美和欧洲一高加索人中广泛存在；B*2704在中国、日本、泰国、印尼和玻利尼西亚人种十分常见；B*2705在强直性脊柱炎的白种人中检出率高达96%，在强直性脊柱炎东方人中检出率也占到了45%，而在正常人中仅为4%-7%；B*2706广泛分布在东南亚人群中，为东南亚人的优势亚型，在印度尼西亚、马来西亚、新加坡和泰国较为多见，而在其他人种中较为少见；B*2707主要在印度、中国和泰国人中存在；而B*2703和B*2709的分布分别局限于西非地区和意大利撒丁岛；B*2708比较罕见，主要存在于英国和亚述尔群岛。 在中国汉族正常人群中，HLA—B*2704和HLA—B*2705构成了HLA—B27的优势等位基因，分别占50．85％和40．68％(合占91．5％) [4]。B*27等位基因的进化机制主要有3种：点突变、基因转变和基因重组，因为HLA—B*2705在全世界各个人群中都有发现，分布最广，所以它被看作是“祖基因”，而其他的HLA一B27等位基因被认为是从B*2705进化而来[5]。 2 HLA-B27的检测方法 2.1微量淋巴细胞毒实验（CDC） 原理是活性淋巴细胞与B27单克隆抗体以及补体共同孵育，弱特异性抗体能识别出淋巴细胞上的B27抗原，则抗体上的可变区蛋白将结合到抗原上形成抗原抗体复合物，然后加入兔补体，激活一系列补体成分，导致细胞溶解，淋巴细胞死亡呈阳性反应[9]。 2.2 流式细胞术（FCM） 流式细胞术（Flow cytometry,FCM）是近年来发展起来的比较先进的技术，利用流式细胞仪对特定细胞群体进行分选或对生物微粒进行多参数快速定量分析。在流式细胞仪上测定，以标记阳性细胞数大于90为HLA-B27阳性。 2.3 引物特异性聚合酶链反应（SSP-PCR） 序列特异性引物-PCR(Sequence Specific Primer PCR,SSP-PCR),设计HLA-B27序列特异的引物，进行一组特异的多聚酶链反应(PCR)扩增HLA-B*Z7基因。目前已发表的HLA-B27引物是特异性针对HLA-B27的外显子2基因的序列，可通过化学试剂公司合成相应的HLA-B27引物，在PCR扩增仪上扩增即可，这种特异性的PCR扩增产物可通过琼脂糖凝胶电泳检出[9]。 细胞毒方法需要分离淋巴细胞，受细胞纯度、补体差异、单抗效价及HLA高度多态性的影响。流式细胞