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摘要
摘要
本实验主要通过对TNF家族成员RANKL与其受体RANK在分子水平及细
胞水平亲和力不同的分析，来说明RANKL与细胞结合的亲和力更具有生理水平
上的意义。其中RANKL是TNF家族成员，RANK是其受体。两者通过相互作
用，在骨重建、风湿性关节炎、骨转移、乳腺发生过程中起重要作用。
首先通过基因工程技术将小鼠的RANKL、RANK基因克隆到原核表达载体
上，再转化到大肠杆菌E．coli中，诱导使其表达目的蛋白，并通过亲和层析，快
速蛋白液相层析(FPLC)以及蛋白复性的方法纯化出有活性的目的蛋白，再运
RAW264．7细胞分化阻断实验则证明RNAKL蛋白具有生物功能，最后通过表面
CELL
亲和解离常数KD为1．09e．10M，再通过ATTANA200分析RANKL与
1．8e．8M。这是第一次在生理水平分析蛋白与细胞上受体的亲和力，更具有真实
性和研究意义。
关键词：RANKLRANK亲和力
Abstract
A
bstract
RANKLisall memberofTNF RANKisits
important family,and receptor．The
inbone
interactionbetweenRANKLandRANKan role
playsimportant rebuilding，
rheumatoid metastasisandbreast the
arthritis，bone developmentprogress．Inpresent
atboth
the betweenRANKLandRANK molecularand
work，weanalyzedaffinity
cellular whichthelaterWasofmore
level，among physiologicalsignificance．
RANKLandRANK wereclonedinto
Firstly,mouse genes prokaryotic
vectorstandard the were
by proteins
expression geneticengineeringprocedures，and
inE．coli through
expressed cells，purifiedaffinity
and shift
assay,protein
chromatographyproteinrefoldingprocedures．Thenpull·down
that toeach
were to th
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