多重耐药大肠埃希菌耐药基因整合子相关性.pdfVIP

温州医学院硕}：学位论义 多重耐药大肠埃希菌耐药基因与整合子相关性研究 中文摘要 目的： 1、对多重耐药大肠埃希菌(Escherichia coli，Ecold临床株B．内酰胺酶类 (p-lactamases，BLs)和氨基糖苷钝化酶类(aminoglycosidemodifyingenzymes， AMEs)耐药基因与I．ⅡI类整合子遗传标记基因之间的相关性进行研究； 2、对多重耐药大肠埃希菌临床株16SrRNA甲基化酶的基因特征与接合传递效 率进行研究，并探讨其与整合子之间的相关性： 3、分析多重耐药大肠埃希菌耐药质粒谱，确立耐药基因在质粒上的座位。 方法： l、采用VITEK．GNS药敏卡测定136株多重耐药大肠埃希菌对14种抗菌素的 beta。Iactamases， 敏感性；纸片扩散法确认超广谱D．内酰胺酶(extended．spectrum 记基因。 2、采用PCR法筛检136株多重耐药大肠埃希菌16SrRNA甲基化酶基因armA、 rmtA、rmtB、rmtC和，聊仍；对阳性菌株作整合酶基因intl、int2和伽疗检测， 并扩增I类整合子可变区插入片段，对扩增产物进行测序与鉴定所含耐药基因 盒；以阳性菌株为供体菌，耐叠氮化钠大肠埃希菌J53为受体菌进行接合试验， rRNA甲基化酶基因进行初步定位；琼脂稀释法测定136 并结合质粒图谱对16S 株多重耐药大肠埃希菌株与接合子的MIC值。 3、采用PCR法检测BLs和AMEs相关耐药基因；质粒小量提取试剂盒提取质 粒；低浓度琼脂糖凝胶电泳检测细菌质粒特征；以标准Z,DNA经HindlII酶切后 的片段(其分子量分别为23．1，9．4，6．6，4．4，2-3，2．0kb)的电泳结果为标准 系统，建立回归方程，换算出质粒DNA分子量。 结果： 100％耐药以外，对 I、136株E．coli呈现多重耐药性，其中，除对AMP和TOB 99．26％、SXT90．44％、LVX 其他12种抗生素的耐药率由高到低依次为：GEN 76．47 82．35％、ATM79．41％、CRO78．68％、SAM 89．70％、CIP88．24％、CFZ ％、CAZ69．85％、AMK28．67％、TZP7．35％和IPMO．74％。136株多重耐药 coli 的E ESBLs产生率高达70．59％(96／136)，产酶株对氨苄西林、庆大霉素、 妥布霉素、亚胺培南和哌拉西林／他唑巴坦以外的其余9种抗菌素的耐药率显著 温州医学院颀I：学位论义 的差异不具统计学意义(尸0．05)，上述两类耐药基因与qacEZ、J．sull遗传标记 基因的三者同时携带率为90．44％(123／136)。 ． 2、在136株多重耐药Ecoli中，共检出16SrRNA甲基化酶阳性菌12株(8．8 rmtC、rmtD基因。阳性菌株均只含I类整合子，对其可变区扩增片段(1000- rRNA甲基 2300bp)的测序结果显示，该区域含有多种耐药基因盒，但不含16S 化酶基因。接合试验与质粒图谱结果初步表明armA和rmtB编码基因位于约23kb 的质粒上，接合试验的耐药质粒传递率高达83．3％(10／12)。 3、136株多重耐药Ecoli含52类不同谱型的质粒群，其中，l型的菌株最多， 有18株，约占13．5％；质粒数目为l～9条，质粒片段大小在0．3×10％p～ 结论： 136株多重耐药Ecoli临床株多重耐药性的形成在BLs基因、AMEs基因与 qacEAl-sulI遗传标记基因三者之间有密切的相关性，而与II和III类整合子无