嗜热栖热菌Thermus+sp.WG内源质粒分离、鉴定序列的分析.pdfVIP

嗜热栖热菌砌P朋跖s sp．WG内源质粒的 分离、鉴定及序列分析 摘 要 ITS分析为不同菌株。最适生长温度75℃， 砌e册印五f屁岱HB8同源性达98％，但16S一23S 最适pH值为7．0。能够抗链霉素、四环素、氯霉素。氨苄青霉素和卡那霉素对它有抑制 Southem杂交鉴定为独立于染色体外的复制元件。推测其为内源性质粒，分别命名为 pWG28、pWGl6和pWGl3。 通过改进的碱裂解法提取了砌删淞踱WG内源性质粒DNA。实验表明质粒DNA能 长。部分限制性内切酶能将砌P删淞印．wG内源性质粒DNA降解成特异大小的条带。将 酶切产物与经过同样限制型内切酶处理的克隆载体连接，转化到大肠杆菌JMl09中，分 子，外源插入片段范围为约O．75bp．12kbp。 测序获得的亚克隆子序列经cap3自动化拼接和手工拼接得到大片段。其中，一个 对、基因预测和进一步注释。获得了3个质粒复制起始蛋白基因，分别命名为rep28、repl6 与嗜热菌噬菌体的复制起始蛋白进化距离较近。 根据染色体上单拷贝的管家基因gapdh和质粒上的复制起始蛋白基因分别设计引 物，实时荧光定量PCR测定了质粒pWGl6相对于染色体的拷贝数，为4．82士1．01。 关键词：嗜热菌质粒鉴定拷贝数测序基因注释 ABSTRACT w嬲a alocalhot 砀P删蝣sp．WG st眺of砀P册淞旃P删印Jllf胁isolated舶m 6Sr【NA Showed SpriI培．1 allalysis 98％llomology aredi丘-ereflts仃aillsidellti矗ed16S一23SITS condition they by aIlalysis．TlleoptiIIlalgrowm is isresistantt0 and for砀e瑚淞sp．WG75℃，pH7．O．It str印Comycinete仃acycline and c_hlorampheIlic01，butve巧sensitiVewith锄picillinkan锄姐cill． 111ree wereidenti6ed自omthisstrain andPulsed— plasmids bygel一embeded砌s豇“lysis andlaterconfi册edSoum锄 werea11 Field-Electrolo百c-Gel-Analysis，by Blot．ney wimm01eCular about l low-copy-nl蛐berplasmids wei曲t 28kbp，16kbp锄d3kbp s印eratiVely，desi印ed嬲pWG28，pWGl6肌dpWGl3． alkaline Isolationoftllese w嬲conduCtedmodified memod． plasmids by lysis TraIlsfo肌antsofthe intoEcD矗