《第2章 细胞生物学研究方法》.pdfVIP

第二章 细胞生物学研究方法 一、显微成像技术 二、细胞化学技术 三、细胞分选技术 四、细胞工程技术 五、分离技术 六、分子生物学方法 1 第一节 显微成像技术 1、光学显微镜 1.1 普通复式光学显微镜技术(图) 原理 (图) 分辨率是指区分开两个质点间的最小距离(图) 分辨率 r = 0.61 λ/n sina 最大分辨率 蓝光λ=450nm, sin70 °=0.94 r = 0.3μm(n=1), r = 0.2 μm(n=1.5) 分辨极限与放大率 光镜样本制作：样品固定、包埋、切片、染色 (图) 2 1.2 常用的光学显微镜 体视显微镜(图) 相差显微镜和录相增差显微镜 倒置显微镜 (图) 暗视野显微镜(图) 荧光显微镜 激光共焦点扫描显微镜技术 3 2、电子显微镜(图) 2.1电子显微镜的基本知识 电镜与光镜的比较 (图) 电镜的分辨率0.2nm 超微结构(亚显微结构) 电子显微镜的基本构造 (图) 照明系统、成像系统、真空系统、记录系统 为什么电子显微镜需要真空系统 2.2 透射电子显微镜(TEM) 超薄切片技术 (图) ：细胞超微结构的观察技术 用于电镜观察的样本制备示意图 (图) 与LM相比,EM样 固定、包埋、切片、染色 品组织固定有什 么特殊要求? 4 负染色技术 (Negative staining)金属投影 (图) 染色背景，衬托出样品（病毒等）的精细结构 （轮廓） 冰冻蚀刻技术（Freeze etching） （图） 冰冻断裂、蚀刻、复型： 作用：主要用来观察膜断裂面的蛋白质颗粒和膜表面 结构。 快速冷冻深度蚀刻技术 (图) 电镜三维重构技术 (图) 膜蛋白、病毒以及蛋白质--核酸复合物等大的 复合体的三维结构。 5 2.3 扫描电镜（SEM） 原理与应用 (图) 样品表面或断面的形貌特征的观察技术 电子“探针”扫描，激发样品表面放出二次电子 (图)， 探测器收集二次电子成象。 样品制备:取材,清洗,固定,脱水,干燥,粘样,喷金 环境扫描电镜 显示生物样品的真实面貌 观察常规扫描电镜较难处理的样品 生物样品的X射线元素分析 生物样品的活体观察 2.4 扫描遂道显微镜 6 第二节