《细胞凋亡201610研究生课》.pptVIP

柱子内的部分，王晓东纯化 不与柱子结合的部分，学生 刘雪松纯化 王对已被激活的凋亡反应的细胞质裂解液进行了分级分离。 他研究了caspase3与细胞核DNA 被剪切的分子机制，受Apaf-1基因调控。 他研究了cytC释放的机制，发现bcl2可抑制cytC线粒体的释放，从而抑制细胞凋亡。 50% 硫酸铵沉淀滤过的蛋白 王晓东的学生发现上清中的蛋白很少，但却含有活性. 是不是因为细胞破碎太剧烈，弄破了线粒体？ 用蔗糖保护的方法。结果还有cytC. 把细胞裂解液中的cytC 用抗体清除 结果细胞裂解液不引起凋亡反应。 Cyt.C的释放可以激活细胞凋亡 他还发现，活性的caspase8促进cytC从线粒体释放。 caspase8剪切tbid, tbid的C端片段从细胞质转位到线粒体，引起cytC的释放。 Bcl2 可以与tbid结合并拮抗它诱导的cytC的释放。 参与调节细胞凋亡的p53基因 既能抑制又能促进细胞凋亡的bcl-2基因家族 bcl-2基因是B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/leukemia-2, bcl2）的缩写。又称”存活基因“（survival gene). 同家族的Bad，Bax，Bak,BID 是凋亡的促进者。 抑制作用 促进作用 BH3 细胞凋亡与疾病及其实验检测方法 一，细胞凋亡与疾病 二，细胞凋亡的实验检测方法 细胞凋亡的生物学意义 发育过程 清除多余的细胞 生理活动过程 清除无用的细胞 病理活动过程 清除有潜在危险地细胞 一，细胞凋亡与疾病 一，细胞凋亡与疾病 （1）细胞凋亡不足 ①肿瘤：凋亡抑制基因Bcl-2基因过高表达------凋亡衰减 促凋亡基因如p53基因突变或缺失，肿瘤发生率↑ 一般肿瘤细胞高表达FasL,借以凋亡淋巴细胞，而又 低表达Fas，而降低自身凋亡。（肿瘤细胞特点是： 损人利己。) 一，细胞凋亡与疾病 ②系统性红斑狼疮 （systemic lupus erythematosus, SLE): 是典型的自身免疫性疾病。 由于Fas表达缺陷，引起自身反应性T细胞的凋亡功能丧失， 导致T淋巴细胞凋亡障碍，因此， 在外周淋巴器官出现大量CD4+, CD8+的T淋巴细胞， 这些细胞具有自身反应性，从而引起SLE自身免疫性疾病 （２）细胞凋亡过度 ①自身性免疫缺陷病－艾滋病： 艾滋病病毒感染后，诱导CD4＋T淋巴细胞过度凋亡，导致患者免疫功能缺陷 一，细胞凋亡与疾病 由HIV感染引起，其关键是CD4+淋巴细胞被破坏，导致CD4+淋巴细胞显著减少，相关免疫功能缺陷。HIV表达gp120, 其受体在CD4的 膜上，与CD4+上的受体结合后导致CD4+凋亡，免疫系统受损。另外，HIV感染的外周T细胞对FasL的诱导凋亡很敏感。 ②神经系统退行性病变－－阿尔茨海默病 AD主要是由于海马及基底神经核的胆碱能神经元大量丧失,病理切片上可见β-淀粉样蛋白沉积和神经元缠结 ③心血管疾病 心力衰竭、 心肌缺血与再灌注损伤 ——— 坏死与凋亡共存 凋亡特点：a.早期凋亡为主，晚期坏死为主 b.梗死灶中央以坏死为主， 　　　　　　周边凋亡为主 （３）细胞凋亡过度积累 自身免疫疾病－关节炎 发生凋亡的细胞，会迅速被吞噬细胞清除． 　 如果凋亡细胞不能及时被清除，则会导致细胞壁破裂，诱发凋亡细胞转化为坏死，从而引起自身免疫疾病． 一 细胞凋亡与疾病 生理性诱导因子：bcl2家族基因, TNF , FasL, TGF-β，神经递质、Ca2+, 糖皮质激素等。 2.损伤相关因子 热休克，病毒感染，原癌基因、抑癌基因、细胞毒性T细胞，氧化剂、自由基。缺血、缺氧等。 疾病治疗相关因子 化疗， 放疗，等 其它某些细胞毒性物质 如乙醇、地塞米松等。 二 细胞凋亡的诱发因素 1. 生理性抑制因子 如bcl-2 ，突变型p53,各种生长因子，细胞外基质。 2. 病毒基因 如腺病毒E1B 等 3. 其它 线虫的ced-9 基因，caspase 抑制剂，促癌剂（如PMA）。 三 细胞凋亡的抑制因素 1.形态学检测 核固缩（折光性增强），核成新月状、花瓣 样，凋亡小体 2.生化特征检测 DNA ladder 3. 流式细胞仪检测 亚二倍体峰（apoptotic peak) 四 细胞凋亡的检测方法 1.形态学检测 －组织，细胞 （定性检测）