山羊痘病毒P32基因跨膜区缺失载体的构建和表达.pdfVIP

农业生物技术学报 Journal ofAgriculturalBiotechnology 2008,16 (3): 385~389  ·研究论文 · 山羊痘病毒 基 因跨膜区缺失载体的构建与表达 *  ,  **,  ,  , 熊 毅 朱 伟， 刘 棋  郑 敏 李华明 郭建刚  (广西壮族自治区动物疫病预防控制中心,南宁 530001） ： （ ， 含有跨膜区， 用全基因表达表达量较低。 实验尝试用重 摘要 基因是山羊痘病毒 ） 的主要免疫原性基因 ， 用 ， ， 在 组 PCR 消除跨膜区， 连接入 pGEX­6p­1载体， 构建重组表达载体 IPTG诱导表达 SDS­PAGE鉴定结果发现 58kD处检 测到蛋白 ，与预期 目的蛋白位置相符。表达产物 以融合蛋 白包涵体的形式 出现在沉淀 中，用 山羊痘标准 阳性血清对其进行 Westernblot检测 ， 表达产物可被 山羊痘标准阳性血清识别。用 Bandscan 软件对所表达的蛋白分析发现， 表达产物约占菌体蛋 白的 29.4%。 ： ; ; PCR; 关键词 山羊痘病毒 基因 重组 表达 中图分类号: S188  文献标识码: A  文章编号: 1006­1304(2008)03­0385­05  Construction and Expression ofVector Encoding  Gene  with TransmembraneDomainDeletion  XIONGYi,ZHUWei ,LIU Qi**,ZHENGMin, LIHua­ming GUOJian­gang ，  ） geneisoneofthemajor immunogenicity geneof  ,but the expression level ofcompleteP32 protein is  relatively low because of its transmembrane domain. In this study, the genes transmembrane domain was deleted by recombinant  PCR,thenthe recombinantDNAwasinsertedintopGEX­6p­1vector and transformed intoBL21(DE3).Therecombinantproteinwas  expressed effectivelyinBL21(DE3) inducedby isopropylthio­ ­D­galactoside(IPTG) in different time, concentration andtemperature,  茁   respect