chap 6 cell culture.ppt

第一节 悬浮培养(suspension culture) 悬浮培养是细胞培养的基本方法，是将单个游离细胞或小细胞团在液体培养基中进行培养增殖的技术。 一. 愈伤组织诱导 要求：松散性好、增殖快、再生能力强。其外观一般是色泽呈鲜艳的乳白或淡黄色，呈细小颗粒状，疏松易碎。 ?选择适宜的外植体：幼胚、胚轴、子叶是最常使用的外植体。 选择适宜的培养基：较高浓度激素浓度；必要的附加物质。 一个成功的悬浮细胞培养体系必须满足三个条件： 悬浮培养物分散性良好，细胞团较小，一般在30～50个细胞以下，在实际培养中很少有完全由单细胞组成的植物细胞悬浮系。 ? 均一性好，细胞形状和细胞团大小大致相同。悬浮系外观为大小均一的小颗粒，培养基清澈透亮，细胞色泽呈鲜艳的乳白或淡黄色。 细胞生长迅速，悬浮细胞的生长量一般2～3天甚至更短时间便可增加一倍。 根据不同培养时间的细胞数变化，或细胞重量变化，即可构成该培养体系的基本参数。 生长速率（p）一般通过不同时间细胞密度（x）的自然对数与起始密度（x0）的自然对数之差与培养时间（t）的比来衡量。 ? p = （lnx – lnx0）/ t ? 单位体积的细胞重量测定细胞生长情况。细胞重量采用鲜重和干重来衡量。一般鲜重只能反应细胞的生长情况，而干重则在一定程度上反应了细胞质量。鲜重和干重的测定方法比较简单，只需按一定体积取样，经真空过滤后称重即可得到鲜