基因芯片原位合新材料和结果分析新方法研究.pdf

摘 要 近年来，借助固相原位合成技术或探针固定化技术制备微型基因芯片进行DNA杂交分 析引起了人们的广泛兴趣。目前用作DNA微阵列原位合成的基片材料多为玻璃片和硅片等， 而聚丙烯膜、尼龙膜等微孔膜大多用于点样法生物芯片的制备。但玻璃具有不易加工成特殊 形状的缺点，而膜又有强的荧光背景。我们首先采用等离子体接枝技术对几种常见的有机聚 合物材料进行了表面功能化改性。以探索新的易加工和更加实用的寡核苷酸原位合成基片材 料。此外，还初步探索了时间分辨荧光方法在生物芯片杂交结果分析中的应用。 r一、H2和N2混合气体等离子体处理聚丙烯微孔膜，采用扫描电镜观察了处理前后膜的 一、、3 形貌变化：真空全反射红外光谱、x一射线光电子能谱和紫外光谱证实在其表面接技了大量活 性氨基：用紫外光谱定量计算得知，所接枝的氨基密度为0．59 I．tmol／cm2，远高于功能化玻璃 上的氨基密度。该改性膜适合于DNA的原位合成，并可得到98％以上的偶联效率，是一种 新型的DNA原位合成基材。 二、以正交试验法优化聚四氟乙烯等离子体处理条件，并对最佳条件下处理的聚四氟乙 烯用x．射线光电子能谱和紫外光谱进行了表征确认。同时，在改性后的聚四氟乙烯上合成了 寡核苷酸探针，利用其与荧光标记的靶序列杂交，分析了正配与错配序列在荧光强度上的区 别。结果表明聚四氟乙烯是～类比聚丙烯微孔膜更理想的DNA原位合成基材。 红外光谱、核磁共振谱和元素分析进行了表征；而且通过条件优化，总产率达到了89．4％， 比文献值提高了17．3％。同时，我们对BCPDA-Eu”进行了荧光分析和时间分辨荧光测定。 结果显示在lO12～10‘8mol／L浓度范围内，螯舍物的时间分辨荧光强度与浓度具有线性关系 从而可对联有BCPDA的靶序列进行定性和定量分析Ⅳ 关键词：等离子体，氨基，聚丙烯微孔膜，聚四氟乙烯，时间分辨荧光，BCPDA 鼍瞄f乜 Abstract Abstract Inrecent hasbeenconsiderableinterestin DNA years，there developinghighlyparallel onminiaturizedflat substrates series ofdifferent hybridization or“chips”-a assays oligonucleotide areimmobilizedonsubstratesmeansofsolid and sequences by synthesis phase加situ probe immobilization situ substratesofin arc techniques．Atpresent．the synthesis ofmicroarrayusually slidesandsilicon of glass wafers．Becausetheir fluoresc