苹果果实SDH基因cDNA片断克隆及其活性调控机理的研究.pdfVIP

目 录 中文摘要…………………………………………………………………………………I 英文摘要…………………………………………………………………………………IⅡ 缩略语表…………………………………………………………………………………V 文献综述植物山梨醇代谢及其相关酶研究进展……………………………………………1 1山梨醇的含量及分布……………………………………………………………………1 2山梨醇在植物体内的生理功能…………………………………………………………1 2．1光合作用产物和同化物运输物质……………………………………………………1 2．2作为代谢基质和贮藏物质……………………………………………………………2 2．3作为渗透调节物质和保护物质提高抗逆性…………………………………………3 2．4作为信号分子…………………………………………………………………………5 2．5组织培养中作为碳源物质……………………………………………………………5 2．6对植物生长发育的调控作用…………………………………………………………5 3植物山梨醇代谢及其相关酶的研究……………………………………………………6 3．1山梨醇代谢研究………………………………………………………………………6 3．2山梨醇代谢相关酶研究进展…………………………………………………………6 4本研究的目的和意义…………………………………………………………………16 第一部分苹果山梨醇脱氢酶(SDH)基因cDNA片断的克隆………………………………17 1材料与方法……………………………………………………………………………………18 1．1材料………………………………………………………………………………18 1．2方法…………………………………………………………………………………19 2结果与分析……………………………………………………………………………23 2．1苹果果实总RNA的提取…………………………………………………………23 2．2cDNA第一链的合成及PCR扩增…………………………………………………23 2．3扩增产物的cDNA克隆……………………………………………………………24 2．4序列测定与分析……………………………………………………………………25 3讨论……………………………………………………………………………………26 3．1关于山梨醇代谢及其代谢酶的深入研究………………………………………26 3．2关于苹果果实总RNA的提取……………………………………………………27 3．3总RNA的质量的检测……………………………………………………………28 3．4关于RT—PCR体系………………………………………………………………29 3．5关于序列分析……………………………………………………………………30 第二部分套袋对红富士苹果山梨醇代谢和相关酶活性的影响……………………………3l l材料与方法……………………………………………………………………………32 1．1材料………………………………………………………………………………32 1．2可溶性糖的测定…………………………………………………………………32 2 1．3酶液的制备…………………………………………………………3 1．4相关酶活性的测定………………………………………………………………32 2结果与分析……………………………………………………………………………33 2．1套袋对红富士苹果果实可溶性糖含量的影响…………………………………33 2．2套袋处理对红富士苹果果实SDH和SOX活性的影响…………………………34 2．3苹果果实可溶性糖含量与山梨醇代谢相关酶问的相关性……………………35 3讨论…………………………………………………………………………………36 第三部分外源糖和激素对苹果果实山梨醇脱氢酶的调控…………………………………38 1材料与方法…………………………………………………………………………………39 1．1材料………………………………………………………………………………39 1．2实验方法…………………………………………………………………………39 1．3酶的提取与活性测定…………………