CaMKII与-型钙通道在人心房肌SK2调控中的作用.pdf

目 录 1 CaMKII 与L-型钙通道在人心房肌SK2 调控中的作用……1 1.1 中文摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„1 1.2 英文摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„5 1.3 前言„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„10 1.4 材料与方法„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„13 1.5 结果„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„20 1.6 讨论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„30 1.7 结论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„40 1.8 参考文献„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„41 1.9 英汉缩略词对照表„„„„„„„„„„„„„„„„„48 2 致谢„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„50 3 小电导钙激活钾通道与其调控因素研究进展（综述） „„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„51 CaMKII 与L-型钙通道在人心房肌SK2 调控中的作用* 摘 要 目的：心房颤动(atrial fibrillation ，AF ，简称房颤)是最常见的心 律失常之一，是由心房主导折返环引发多个小折返环导致的房律紊 乱。AF 几乎见于所有的器质性心脏病与部分非器质性心脏病，并引 发严重并发症，如心力衰竭和动脉栓塞等。小电导钙激活钾通道 （small conductance calcium-activated potassium channel, SK channel ） 在心血管系统主要分布于心房肌细胞，其中以 SK2 亚型为主。SK2 + 通道开放引起的 K 外流在心肌细胞膜复极过程中具有重要作用。钙 调蛋白（calmodulin, CaM ）是真核生物细胞中的胞质蛋白，是 SK2 通道的亚单位之一，它通过与 Ca2+及 SK2 通道上 CaM 结合区域 （calmodulin bind domain，CaMBD ）结合后对SK2 通道进行调控。 在AF 状态下，SK2 通道功能发生何种改变、CaM 对 SK2 通道的作 用机制是否发生改变尚不清楚；钙调蛋白依赖性蛋白激酶 （Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase，CaMK ）是CaM 作用于蛋 白的介质，CaMK 对 SK2 通道功能是否有调节作用也鲜有报道，深 入讨论这些问题对揭示AF 的病理生理机制与防治有重要意义。本实 验通过全细胞膜片钳技术观察AF 患者心房肌细胞SK2 通道电流的改 变以及CaMK 对 SK2 通道的调控，为探讨AF 发生机制与防治方法 提供理论基础和实验依据。方法：采用全细胞膜片钳技术研究人心房 * 国家自然科学基金资助项目（N） 1 肌SK2 通道电流变化：23 例接受心胸外科体外循环手术患者分为两 组：心房颤动组（atrial fibrillation，AF ）9 例，窦性心律组（Sinus rhythm， SR ）14 例。取患者手术过程中切除的右心耳组织，保存于氧饱和 3 Cardioplegic 液中，剪为1×1 mm 组织块，置于酶液中进行两步消化。 选取贴壁良好，折光性强，具有立体感，表面光滑的心房肌细胞进行 实验。将细胞置于浴液中，采用全细胞膜片钳技术记录电流，阶跃方 波脉冲方案：保持电位（holding potential ，HP ）：-60 mV ，从-130 mV 以10 mV 阶跃除极至+60 mV ，脉冲时程200 ms 。电流信号通过膜 片钳放大器 （Axopatch 200B ）放大，滤波器处理后 （1 KHz）输入计 算机，经Clampex 10.1 软件采集电流，Clampfit 10.1 软件系统进行数 据分析。实验观察和比较CaMKII 特异性阻断剂KN-93 和L-型钙通 道特异性阻断剂维拉帕米（verapamil ）对 SK2 通道的影响。结