HBXIP调节腺癌细胞迁移的分子机制及其蛋白纯化条件的探索.pdf

摘要 摘要 B 乙肝病毒X蛋白结合蛋白(HepatitisX．interactingproton，HBXIP)因可 BvirusX 与乙肝病毒X蛋白(hepatitisprotein，HBx)的羧基端特异性结合而得 名，在细胞凋亡及有丝分裂等细胞生命活动过程中发挥重要作用。我们发现， 作为一类小分子非编码RNA，可以参与肿瘤发生、发展等诸多生命活动。本室 前期研究发现，在不同转移潜能的乳腺癌细胞系中，HBXIP和miR．520b的表达 水平均存在差异，且二者在表达量上呈负相关。本研究以不同转移能力的人乳 乳腺癌细胞迁移的分子机制，并对HBXIP的纯化条件进行了初步探索，主要研 究内容如下： 1．HBXIP调节乳腺癌细胞迁移的分子机制 在前期研究基础上，应用westernblot及实时定量PCR法分别检测了三种不 同转移能力乳腺癌细胞系中HBXIP和miR-520b的表达水平，发现具有高转移 可能促进乳腺癌细胞迁移，而miR-520b可能抑$U-孚L腺癌细胞迁移。近年来， HBXIP一直是本室的研究重点，为了阐释HBXIP促进乳腺癌细胞迁移的分子机 制，我们应用生物信息学方法进行了预测，发现HBXIP是miR．520b的靶基因 Y-untranslated 之一。接下来，我们克隆了含HBXIP 突变体的报告基因载体，双荧光素酶报告基因实验及westernblot检测结果显示， 胞系的迁移能力也随之降低，表明HBXIP促进乳腺癌细胞迁移的过程受 miR．520b的调控。 本实验对HBXIP调节乳腺癌细胞迁移的机理进行了探索，其分子机制是： 摘要 移。 2．HBXIP蛋白纯化条件的探索 HBXIP全长173个氨基酸，分子量约19kDa，几乎表达于高等动物的各种 组织中，但在肌肉组织和恶性肿瘤组织中高表达。HBXIP可以参与细胞凋亡、 中心体复制、细胞迁移、细胞周期等过程，揭示HBXIP的蛋白晶体结构有助于 进一步了解HBXIP在细胞生命活动中所发挥的作用。实验中，我们构建了含 核表达载体pet-28a-HBXIP2，利用亲和层析、分子筛层析、离子交换层析等方 His．HBXIPl经分子筛层析纯化后，吸收峰单一，但蛋白浓度较低；经离子交换 His．HBXIPl情况类似。 本实验对HBXIP的纯化条件进行了初步探索，发现His．HBXIP的分子筛层 析纯化效果优于离子交换层析。 关键词：HBXIP乳腺癌细胞迁移miR．520b蛋白纯化 II Abstract Abstract B rolesin HepatitisX—interactingprotein(HBXIP)，whichplaysimportantmany that cellular as and named to itcail activities，such mitosis，was apoptosis according bindtotheCterminalof BvirusX hepatitis foundHBXIPcallinvolvein that breastCanCelcell promoting migration．However, themolecularmechanismiS