HIV-1病毒膜蛋白GP41的截短表达及抗原活性验证.pdf

·中文论著摘要· HIV-1病毒跨膜蛋白GP41的截短表达 及抗原活性验证 目的 当前，艾滋病病人及其病毒HIV-1型携带者的数目逐渐增多，急需一种优质廉 价的诊断试剂来预防和监测。目前，针对HIV-1感染的检测主要是抗体和核酸检测， 国内主要是进行抗体检测，包括病人血液和尿液中的抗体。HIV-1结构基因er／1,编 码的跨膜糖蛋I白GP41是病毒表面抗原，可诱导机体产生特异性抗体。因此，在大 多数艾滋病诊断试剂中GP41抗原都是主要标记物之一。本实验通过构建基因重组 GP41抗原，为生产研制抗HIV-1抗体诊断试剂提供优质抗原。 方法 本实验首先通过PCR方法，从含有GP41全长基因片段的质粒中扩增出包含主 要抗原表位的GP41截短体基因片段，先后插入到原核表达载体pET-28a和 先进行小量诱导以确定目的蛋白是否表达，确定目的蛋白能表达后扩大诱导表达 量以进行下一步的纯化。用镍亲和树脂和GST亲和树脂亲和层析纯化目的蛋白。 最后，通过Westem-blot和ELISA方法对重组蛋白的抗原性进行验证。 幺皇田 拿日刁写 表达质粒在BL21中不能有效的表达，尝试了不同的诱导时间，温度，IPTG的浓度 获得高效表达，重组蛋白占菌体总蛋白的29．37％，主要以包涵体形式存在，可溶 性重组蛋白只占目的蛋白的一小部分。分别对可溶部分和包涵体部分的蛋白进行 有很的抗原活性。 锢◆‘结论 白和包涵体形式的蛋白进行分析发现，两者均具有抗原性，包涵体蛋白无需变形、 复性等步骤也可具有抗原活性。本实验获得了GP41截短体在大肠杆菌中的高效 以抗HIV-1抗体为基础的检测试剂的研发奠定了基础。 ，’●，-’。’关键词 人类免疫缺陷病毒I型；重组蛋白GP41；基因表达；抗原活性 2 ·英文论著摘要· 0IofHIV-11 noitaTruncationcn乏randbdmemsnart expresslon pro GP41andthe verification protein antigenicity Objective infectedwitllH1V-1virusorcarriedHIV-1virushas Currently,amountofpatients increased be needofakindof in diagnosiswhichis gradually,tobadly reagent and to anddetecttheinfections．Thedetectionaimedat high-qualitycheapprevent andnucleicacidiSthemainmethodinHIV-1infectiondetection．In antibody