HIV-1蛋白诱导细胞G2M期停滞检测平台的建立.pdf

摘要 摘 要 人免疫缺陷病毒(human virus，HIV)属于反转录病毒科慢 immunodefieiency 病毒属。它会引起人的免疫缺陷综合征(acquiredimmunodeficiencysyndrome． AIDS)，即当人体感染HIV后逐渐降低机体的免疫功能，最后各种机会性感染 会导致机体的死亡。HIV感染流行一直难以控制，主要原因就是因为其基因的 高度变异性。目前HIV感染者尚无法治愈，也无有效的预防性疫苗。 病毒蛋白R(Viral Protein＆Vpr)是HIV编码的非结构蛋白，在病毒包装 过程中被包装到病毒粒子，在HIV致病过程中发挥多种功能。包括Vpr会增强 逆转录过程的保真性；促进整合前复合体入核；促进HIV-1LTR的转录：诱导 宿主细胞G2期阻滞和促进细胞凋亡等。 本文前期以Vpr作为“诱饵，通过酵母双杂交找到了与其相互作用的蛋白 RelB。RelB是NF．1出非经典通路的转录激活因子之一，主要参与许多免疫和炎 症反应相关基因的表达与调控。 本课题选择HW-1Vpr基因作为研究的对象，构建了Vpr的原核和真核表达 抗体。同时通过自制的Vpr抗体，检测了Vpr在HeLa细胞中定位，确证了Vpr 为核浆共定位，但主要分布于细胞核。同时在293T和HeLa两种细胞中通过在 DNA水平和蛋白水平两个层面，建立了Vpr诱导细胞周期停滞在G2／M期的检 测平台。进一步检测RelB对Vpr诱导G2／M期捕获的影响，结果发现：在293T 中，RelB自身会促进细胞周期的进程，使细胞较多的处于G1期；在HeLa细胞 中，在DNA水平上RelB自身对细胞周期的影响不明显，但是在蛋白水平上RelB 发挥着促进Vpr诱导细胞周期G2／M期捕获的功能。 关键词：人类免疫缺陷病毒；Vpr蛋白；G2／M捕获；RelB abstract Abstract AIDS，called a kindof Acquired lmmunodefieieneySyndrome，is disease，Human Vkrus(HIV)isthe of Immunodeficiency Immunodeficiencypathogen cancauseinfected AIDS，which toweaknessofimmunefunction patientsprogessing and toAIDSintheend．Becauseof infectionand progessing opportunity cancer, infected will still carlnotbecured patients now,AIDS orbe die．By completely thebottleneckisthe vaccine，and rateofHIV preventedbyany hi曲variation gene． isannon-structual ofhuman