Netrin-基因修饰骨髓间充质干细胞治疗大鼠心肌梗死.pdf

中文摘要 中文摘要 骨髓间充质干细胞(MSCs)是修复损伤心肌的理想干细胞，但其在缺血缺 氧微环境下的低存活率已成为MSCs临床应用的瓶颈。Netrin-l是一种神经介 导蛋白，近年来发现其在心血管方面的重要作用，Netrin．1可以促进心肌和内 的增殖和迁移有促进效果。本研究通过逆转录病毒转导使MSCs过表达Netrin-1 基因，在RNA和蛋白水平上检测Netrin．1基因的表达，NO的分泌量以及 Netrin．1．MSCs到大鼠心肌梗死部位，完成心肌坏死面积，胶原含量及心脏功能 等方面的研究。 用贴壁法从大鼠腿骨中分离培养骨髓间充质干细胞，在细胞传代至三代的 双酶切和PCR进行鉴定。用磷酸钙法包装含有目的基因Netrin．1的逆转录病毒， 高效转导大鼠间充质干细胞。用流式细胞仪检测Netrin．1基因转导百分率，可 达到60％以上。 采用RT-PCR及Westernblot在RNA水平和蛋白水平上检测到MSCs中 相比有明显提高。 我们建立了大鼠心肌梗死模型，将200．2309大鼠心脏左前降支冠状动脉永 盐水组心肌损伤面积和胶原含量得到显著改善，通过vWF和isolectin免疫染色， 也有一定程度的改善，通过WGA免疫染色发现Netrin．1一MSCs组较之盐水组和 中文摘要 MSCs组心肌肥大的情况均得到显著改善。 在心血管领域，首次引入Netrin．1基因，将其应用于心脏疾病的治疗研究。 本研究将转基因技术与干细胞技术相结合，利用骨髓干细胞取材方便，又可以 分化成心肌细胞帮助心肌修复的功能，同时结合Netrin．1可以促进细胞增殖迁 移，减少细胞凋亡，释放NO保护心肌等特点，为心肌梗死的治疗开辟新途径。 相信随着研究的深入，Netrin．1在心脏中的保护作用和相关调节将会逐渐变得 清晰，为疾病临床治疗提供新的思路与希望。 关键词：骨髓间充质干细胞，Netrin．1，NO释放，心肌梗死，血管新生 Abstract Abstract kind cellsfor Bonemarrow stem a ofidealstem mesenchymalcells(MSCs)is thelowsurvivalrateinischemicand repairinginjuredmyocardium，however environmenthasbecomethebottleneckoftheclinical ofMSCs． hypoxic application Netrin-1’Sasecretedmoleculethatis knownto adefinedrolein largely play guiding vertebratecommissuralaxonsinneuronal studieshavefurther development．Recent demonstratedacriticalroleofNetrin．1incardiovascular．IthasbeenshownNetrin．1 Can theheartinducethenitric of and protect by oxide(NO)productionmyocardial endothelialcell infarction．In Call the