IL-13和乙促进人肺成纤维细胞胶原表达.pdf

＼嗍嬲 摘要 摘 要 目的： 纤维化作用。本实验检测乙醇对人肺成纤维细胞(HFL．1)增殖以及HFL—l细胞 (COLlAl、COL3AlmRNA)的表达以及胶原蛋白合成的影响，从分子水平和 蛋白水平探讨乙醇对IL．13介导的肺纤维化的作用机制。 方法： 1．台盼蓝染色检测HFL．1细胞活性。2．HE染色观察HFL．1细胞形态。3．细 胞代谢测定(MTT比色法)检测乙醇和／或IL．13刺激HFL．1细胞后的增殖：细 胞分组：①空白组②IL一13组(10 mM、 ng／ml、20ng／ml和50ng／m1)③乙醇组(25 mM、100mM、200mM、400mM、800mM、1600 mM、 50 mM)④乙醇(25 50mM、100mM、200 mM)和IL一13(10 ng／ml、20 ng／m1)混合组 ng／ml和50 time RT-PCR)分析IL-13(10 4．采用实时荧光定量RT-PCR(Real ng／ml、20ng／ml mM、50mM、100mM、200 和50 mM)对HFL．1细胞 ng／m1)和／或乙醇(25 mRNA，IL．13Ral 刺激前后各组IL．4Ra mRNA和IL．13Ra2mRNA以及 COLlAl、COL3A1mRNA表达的影响。5．ELISA方法检测IL．13(10 ng／ml、 mM、50mM、100mM、200 20 mM)对HFL．1 ng／ml和50ng／m1)和／或乙醇(25 细胞刺激前后各组细胞培养液中I型胶原蛋白的表达的影响。 结果： mM)对HFL．1细胞无毒性作用。 1．HFL．1细胞活性良好，低浓度乙醇(200 2．HE染色观察HFL．1细胞为长梭形，胞质被染成粉红色，胞核为椭圆形被染成 蓝色。3．f氐浓度乙醇(200mM)不会影nIjJHFL．1细胞的增殖，但与IL一13(10 ng／ml、 20 ng／m1年N50ng／m1)共同刺激下对HFL-1细胞的增殖有显著的促进作用，IL．13 (10 ng／ml、20ng／ml和50ng／m1)对HFL—l细胞有促增殖作用，且有浓度依赖性。 摘要 4。Realtime mM、100mM、200 RT-PCR检测结果显示，低浓度乙醇(50 mM) mRNA，IL．4Ra 刺激HFL．1细胞后IL．13Ral