不同纤维直径的毛羊皮肤组织中毛囊差异蛋白质双向电泳与质谱分析.pdf

现代农业产业技术体系建设专项“国家绒毛用羊产业技术 体系 (项目编号：CARS．40)； “十二五新疆维吾尔自治区重大专项“新疆毛、绒羊新 品种选育与产业化示范 (项目编号：201230116—6)； 新疆维吾尔自治区研究生科研创新项目“超细毛羊、细毛 羊和半细毛羊皮肤组织中蛋白质差异表达研究’’ (项目编号：XJGRl2013110) 万方数据 不同纤维直径的细毛羊皮肤组织中毛囊差异 蛋白质双向电泳与质谱分析 摘要 本文以不同纤维直径的细毛羊皮肤组织中的毛囊作为实验材料，利用不同的提取方 法，不同pH值的IPG胶条以及不同的上样量。探索适用于细毛羊皮肤组织的双向电泳 体系，建立细毛羊皮肤组织的2-DE凝胶图谱，挖取差异明显的蛋白点进行质谱鉴定， 鉴定肽指纹图谱并在数据库中比对，结合生物信息学知识分析这些差异蛋白与羊毛纤维 直径的内在联系。对提高羊毛品质具有重要的实际意义。主要获得了以下结果： 毛囊组织总蛋白质的提取。 2．选择用pH3．10的IPG胶条分离皮肤组织中的毛囊总蛋白，摸索蛋白点主要集中的 4．7，长度为18cm长的IPG线性胶条，这样有助于将皮肤组织中的 范围。实验中使用pH 4-7 1201xL，最后选择上样量为1001．tL时图谱最清晰。上样量为1001．tL，选择18cm，pH 的线性IPG胶条，得到质量较好的双向凝胶电泳图谱。 3．对两岁的超细型、细型细毛羊毛囊蛋白质2-DE凝胶图谱进行分析，检测出其中 于超细型，细型中出现的四个蛋白质均为下调。在下调蛋白中只有差异点7为超细型细 毛羊中出现的差异蛋白。对四岁的超细型、细型细毛羊毛囊蛋白质2-DE凝胶图谱进行 下调，其余蛋白均为上调。这三个差异点均为细型细毛羊中出现。 4．不同纤维直径的细毛羊毛囊蛋白质差异比较得到73个质谱鉴定结果以及73套肽 质量指纹图谱，在NCBI数据库进行搜索，匹配有意义的蛋白质，进行综合分析，成 功鉴定73种不同的差异表达蛋白。不同年龄的超细型细毛羊毛囊蛋白质差异比较得到 33个质谱鉴定结果以及33套肽质量指纹图谱，其中有12个与不同纤维直径的细毛羊差 异蛋白组重复。本文将94个蛋白质按其主要功能属性划分为8类。 关键词：细毛羊；双向电泳；质谱鉴定；蛋白质组学 万方数据 inHairFolliclesoftheSkin StudiesonDifferentofProteins FiberDiameter TissueofFine--woolwithDifferent Sheep Using Two-dimensionalandMass ElectrophoresisSpectrometry Abstract This chosenthedifferentdiametersoffollicleswhichtakenfromthe Experiment fine·wool skintissueasthetest differentextraction sheep’S material，use valuesoftheIPGadhesiveanddifferentamountof to pH strip