地黄RAPD-CAR标记及其生物信息学分析.pdf

摘要 地黄是我国最为名贵的中药材之一，随着中药现代化和国际化的进程，国内外对地 黄的研究逐渐广泛和深入起来，需求量也越来越大，这也对地黄的产量和品质提出更高 更严格的要求，但现在地黄生产中存在着品种混乱，随意命名的现象，这对科学选育优 质高产地黄新品种十分不利。本实验以21个取自温县农科所种资资源圃的地黄品种为 为怀地黄的品种鉴定和分子标记辅助育种提供快捷简便的方法，取得了以下主要结果： 1本实验采用单因子方法，以密县野生的基因组DNA为模板，分别对DNA模板 buffer 反应体系为：总体积为25p．1，其中PCR 2．5斗l，dNTP(10mM)0．51xl，Tap酶(2U／p．1) 94℃5 rain；94℃1min，36℃1矗in，72℃2min，共40个循环；72℃10min，4C保存。 2利用上述体系，分别以密县野生、小黑英、北京1号为模板，从100条引物中筛选 出了6条多态性强的引物。采用RAPD分子标记技术，通过6条多态性强、稳定性好的引 物，对21个怀地黄品种进行了遗传多样性分析和聚类分析。共扩增出36个条带，其中多 态性条带27个，多态位点百分率为75％，等位基因数为1．7500，有效等位基因数为1．3074， 软件将供试地黄分为五类：0821、03．2、小黑英、金状元、08．13、金三黄、山西北相、 北京l号和北京3号聚为C类，郭里茂、03．18、0802聚为D类，生滓1号聚为E类。 3利用引物s135从济源野生中扩增出了一条350bp左右的特异性条带，能准确的 将其从21个地黄品种中区分出来，对此片段回收、克隆、测序，得到了三个长度分别 1 1 个SCAR标记：SCARl(340bp)、SCAR2(43bp)和SCAR3(35bp)，它们能够把济源野 生与其他21个地黄品种区分开来。 4运用相关软件对这三个序列进行了生物信息学分析，发现这三个序列均为富含 nucleofidefactor 质与鸟嘌呤核苷酸转换因子VAV3(guanine exchange 可能编码的氨基酸序列和NCBI中T-cell receptor NCBI中Putative aminopepfidase(z1)的相似率为88％。 关键词：地黄，遗传多样性，生物信息学分析，RAPD，SCAR II ABSTRACT RehmanniaiSoneofthe mostvaluableChineseherbalmedicinesinChina．Withthemodernization andinternationalizationof Chinese onrehmanniaathomeand medicine，studies abroadhasbecome and demandforrehrnanniaincreased．The increasinglyprevalent far-reaching，the h鹤been requirements for rehmanniaand becomesand thatvarious yield quality higherstricter．However,the phenomena disorderedvarietiesandrandomnames inthe ofrehm