地黄RghBN基因的结构分析和功能验证.pdf

lUllI lllllIII I II UllI 摘要 地黄是大宗常用中药材，是近年来中药研究的热点之一，被应用于医药、保健品、 食品等多种领域，市场需求量大。目前，地黄和其他植物一样生活在诸多胁迫因素影响 的环境中，其耐胁迫机理需深入研究，耐胁迫品种培育的问题亟待解决。另一方面，虽 然植物包括地黄的基因及其功能的研究不断深入，但是，明确具体功能的基因并不太多。 地黄耐胁迫基因的研究可为这些问题的研究与解决提供一些基础与参考。RghBNG基因 是我们2013年首次从地黄中克隆的未知功能基因。为了进一步研究该基因的结构和功 分析了在非生物因素和植物生长调节剂下RghBNG基因的表达。主要结果如下： 找到同源氨基酸序列。该基因编码蛋白的氨基酸相对分子量为18571．8Da，等电点为 9．45，编码带正电荷碱性蛋白，其二级结构主要由c【一螺旋、p．转角、不规则卷曲构成， 该蛋白没有信号肽，为非分泌蛋白。 在植物顺式作用元件数据库PLACE预测，类似启动子序列，含3处TATAbox，两处 蛋白结合位点HD．Zip 式调控元件Skn-1n10tif和参与光合作用基因的光调节表达以及叶片特异性表达的 条578 bp，包含一个390 链，与根癌土壤杆菌、土壤杆菌的纤维素合酶基因的同源性达81％～91％；，其所编码 的氨基酸序列与根癌土壤杆菌、土壤杆菌、菜豆根瘤菌、豌豆根瘤菌纤维素合酶基因编 码的氨基酸序列的同源性高达83％～99％：其推测蛋白质具有纤维素合酶的结构域。 的地黄根、叶两个组织中的表达量。结果表明紫外光照可以诱导RghBNG蛋白在叶中的 RghBNG表达量最高，赤霉素诱导的表达量次之，6．BA对其显示出抑制作用。结果表 明，RghBNG基因的表达与地黄响应非生物和植物生长激素胁迫机制有关，耐铬和盐胁 迫，受赤霉素诱导。 4． 分别以风fI和Hind 激光共聚焦显微镜观察结果显示，GFP分布在洋葱细胞的细胞核、细胞质和细胞膜内， RghBNG分布在细胞质和细胞膜上。 胁迫，生物信息学，亚细胞定位 关键词：地黄，RghBNG，启动子，RT-qPCR， II ABSTRACT aS Chinese oneofthehot in Rehmanniais usedtraditional commonly medicine，is topics the oftraditionalChinese recent hasbeen in many study medicine(TCM)inyears，it applied fieldssuchas care andthereisa dermndforit inthe medicine，health products，food big environmentalstressfactorslikeother market．Currently,Rehmanniaefacingmany plants，and itsstressresistancemechanismandslresstolerant havetobesolved． breedingvarietyproblem theirfunctionof Rehmanniaehavebeen ontheother