西尼罗病毒免疫断方法的建立及对入境人员的血清调查.pdfVIP

摘要 自我组装成病毒样颗粒(virus．1ike 染293T细胞，获得大量的纯化蛋白，以此蛋白作为抗原研制检测西尼罗病毒抗体的 ELISA试剂盒，用试剂盒来实现对我国出入境人员的血清进行调查。 方法：筛选典型西尼罗病毒株，构建重组质粒，大规模转染293T细胞，优化转染 的条件和方法，表达西尼罗病毒prM-E蛋白，获得大量的表达重组蛋白，通过间接免疫 荧光实验验证表达抗原的完整性和特异性，纯化西尼罗病毒prM．E蛋白抗原，ELISA对 表达产物进行鉴定制成大规模的检测试剂盒；采用蔗糖梯度离心10．60％结合超速离心 纯化表达产物；将纯化的表达产物包被子聚苯乙烯微量反应板，与待检血清中抗WNV 抗体反应后，经洗涤，再加入辣根过氧化物酶标记羊抗人埯G与之结合，然后用TMB作 检测。 like 结果：重组质粒转染细胞后产生病毒样颗粒(virusparticlesVLPs)，优化转染的条 件和方法，从转染的293T细胞从细胞的上清液中和细胞中的表达的蛋白的的纯化物中 获得大规模的重组蛋白，通过间接免疫荧光试验表明，表达的病毒样颗粒蛋白具有良好的 抗原性；间接ELISA证实，重组蛋白可以作为抗原用