《琼脂糖凝胶电泳_原理_步骤_详细》.ppt

上海交通大学医学院 玻璃片 上海交通大学医学院 上海交通大学医学院 上海交通大学医学院 预染色的标本 上海交通大学医学院 ＋ 上样处 玻片 琼脂糖凝胶 上海交通大学医学院 上海交通大学医学院 上海交通大学医学院 上海交通大学医学院 ?????????????????????????????????????? CM 上海交通大学医学院 正常参考值（百分比） α-脂蛋白 30-40% 前β-脂蛋白 15% β-脂蛋白 55% 注意事项： ①血清样品要新鲜 ②为了免去离心步骤，吸取预染血清时，应吸取上层，下层或管底可能有染料颗粒沉渣，否则应再离心后吸预染血清 上海交通大学医学院 名词解释 1.迁移率 2.电渗 3.电泳 问答题 1.影响电泳迁移率的因素有哪些？ 2.试述琼脂糖凝胶电泳分离脂蛋白的原理。 复习思考题 上海交通大学医学院 参 考 书 目 《临床生物化学及生物化学检验》 第三版 人民卫生出版社 周新 主编 《电泳》科学出版社 何忠效 张树政 主编 《蛋白质电泳实验技术》 科学出版社 郭尧君 《蛋白质技术手册》 科学出版社 汪家政 范敏 主编 ? ? * * * * * * * * * 上海交通大学医学院 / 李莉 琼脂糖凝胶电泳 Agarose Gel Electrophoresis 上海交通大学医学院 讲课内容 概述 1 琼脂糖凝胶的特点 2 琼脂糖凝胶电泳的应用 3 影响迁移率的因素 4 琼脂糖凝胶电泳分离血浆脂蛋白 5 上海交通大学医学院 概述Introduction Gel Electrophoresis ：由琼脂、琼脂糖、淀粉胶及聚丙烯酰胺等物质作支持体的电泳。 特点（characteristic）： 1.可以制成非常均匀的凝胶，带电质点在凝胶的孔中泳动 2. 电泳操作方法简便，电泳速度快 3. 分辨率高，重复性好，电泳图谱清晰 4. 适用于生化，免疫等定性定量测定 上海交通大学医学院 琼脂糖凝胶（Agarose Gel ） 天然琼脂（agar）:又名琼胶、菜燕、冻粉 从石花菜及其它红藻类植物提取出来的一种线状高聚物。 琼脂糖（agarose） 琼脂果胶（agaropectin） Acid sulfate Carboxylic acid groups 上海交通大学医学院 D-半乳糖 3，6-脱水-L-半乳糖 琼脂糖（Agarose） 半乳糖及其衍生物构成的中性物质 上海交通大学医学院 上海交通大学医学院 讲课内容 概述 1 琼脂糖凝胶的特点 2 琼脂糖凝胶电泳的应用 3 影响迁移率的因素 4 琼脂糖凝胶电泳分离血浆脂蛋白 5 上海交通大学医学院 琼脂糖凝胶的特点 （一）优点（advantage) 1.因不含硫酸根和羧基，几乎消除了琼脂的电渗 2.对蛋白质吸附极微，故无拖尾现象 3.凝胶结构均匀，孔径较大，可用来分离酶的复合物、核酸、病毒 等大分子物质 4.透明度较好，可直接或干燥成薄膜后进行染色 5.不吸收紫外光，可直接利用紫外光吸收法作定量测定 6.有热可逆性 上海交通大学医学院 （二）缺点(disadvantage) 1.机械强度差，易破碎，浓度不能太低 2.易被细菌污染，不易保存，临用前配制 3.琼脂糖支持层上的区带易于扩散，电泳后必须立即固定染色 4.与PAGE相比，分子筛(molecular sieve)作用小，区带少 上海交通大学医学院 讲课内容 概述 1 琼脂糖凝胶的特点 2 琼脂糖凝胶电泳的应用 3 影响迁移率的因素 4 琼脂糖凝胶电泳分离血浆脂蛋白 5 上海交通大学医学院 琼脂糖凝胶电泳的应用Applications of Agarose Gel Electrophoresis  1. 适用于大分子的核酸、核蛋白等的分离、鉴定及纯化 2. 临床生化检验中常用于LDH、CK等同工酶的分离与检测 3. 为不同类型的高脂蛋白血症、冠心病等提供生化指标 ? 上海交通大学医学院 The gel with UV illumination, the ethidium bromide stained DNA glows orange 上海交通大学医学院 Digital image of 3 plasmid restriction digests run on a 1% w/v agarose gel, 3 Volts/cm, stained with ethidium bromide. The DNA size mar