稳定表达犬瘟热病毒受体SLAM的BHK-21细胞系的建立.pdfVIP

曼量曼曼曼量曼曼曼皇量皇鼍曼曼曼量曼曼曼皇曼皇曼量曼曼量曼曼曼皇曼曼V^^^-■’一”’二”曼曼 一～一一 目 录 中文摘要……………………………………………………………………………………………．I ————葺一燃鳓一 英文摘要…………………………………………………………………………………………．．III 1．引言………………………………………………………………………………………………．1 1．1犬瘟热病毒研究进展………………………………………………………………………．1 1．1．1犬瘟热病毒的生物学特性……………………………………………………………一1 1．1．2犬瘟热病毒的基因组结构……………………………………………………………．．2 1．1．3犬瘟热病毒结构蛋白及其功能………………………………………………………一2 1．2犬瘟热概述…………………………………………………………………………………．5 1．2．1临床症状………………………………………………………………………………一5 1．2．2流行病学………………………………………………………………………………．．6 1．3犬瘟热病毒受体的研究进展………………………………………………………………．6 1．4犬瘟热病毒的分离培养……………………………………………………………………．7 1．4．1原代细胞………………………………………………………………………………．．7 1．4．2传代细胞………………………………………………………………………………．．8 1．4．3稳定表达SLAM的细胞系……………………………………………………………．8 1．5犬瘟热病毒的检测…………………………………………………………………………．9 1．5．1病原检查………………………………………………………………………………．．9 1．5．2免疫学诊断……………………………………………………………………………．．9 1．5．3分子生物学诊断………………………………………………………………………10 1．6犬瘟热病毒的防治…………………………………………………………………………lO 1．6．1疫苗免疫………………………………………………………………………………ll 1．6．2临床治疗………………………………………………………………………………1l 1．7研究目的及意义……………………………………………………………………………11 2．材料与方法………………………………………………………………………………………13 2．1实验材料……………………………………………………………………………………13 2．1．1菌株、毒株、质粒及细胞系…………………………………………………………13 2．1．2病料来源………………………………………………………………………………13 2．1．3 PCR扩增’弓I物…………………………………………………………………………．13 2．1．4主要试剂………………………………………………………………………………．14 2．1．5主要仪器………………………………………………………………………………15 2．2实验方法……………………………………………………………………………………16 2．2．2细胞培养物中CDV病毒载量的检测………………………………………………．．23 2．2．3 CDV流行毒株的分离…………………………………………………………………25 2．2．4不同CDV毒株生长情况比较………………………………………………………．．26 i 东北农业大学硕士学位论文 3．结果………………………………………………………………………………………………27 3．1．1犬SLAM基因的克隆…………………………………………………………………27 3．1．2重组真核表达载体的构建………………………………………