姜黄提取物对SK-N-SH细胞谷氨酸损伤保护及其Bcl-2、Bax基因和蛋白表达的影响.pdf

中文摘要 姜黄提取物对SK—N—SH细胞谷氨酸损伤保护、凋亡及相关 蛋白表达的影响 摘 要 目的： 血管性痴呆(VD)是由一系列脑血管因素(缺血或出血性以及急 慢性缺氧性脑血管病)导致脑组织损害所出现脑功能障碍的一种获 得性智力损害综合症。对于VD的治疗，目前尚无特效疗法。现代 医学主要方法为通过预防脑血管病，对于临床有脑血管病危险因素 的患者，包括高脂血症、高血压病、心脏病、糖尿病等，早期进行 防治，以预防脑血管病，进而预防VD的发生。导师以往的研究显 示姜黄素或姜黄提取物能够通过降低血清及脑组织中MDA含量， 升高SOD活性，及使血清及脑组织的ET含量降低，CGRP含量升 高，以改善拟血管性痴呆模型小鼠学习记忆能力。为了进一步探讨 姜黄提取物治疗VD的机理，本次实验设计为细胞培养，通过姜黄 提取物结晶体(包括姜黄素、去甲氧基姜黄素、双脱甲氧基姜黄 达的影响，探讨其治疗VD的机理。 方法： 1SK．N-SH细胞培养方法： SK-N．SH细胞冻存于液氮中，用时进行复苏。培养液为1640 培养液，在37℃，5％C02饱和湿度培养箱中培养，待细胞长满培 液终止消化，用吸管轻轻吹打，使细胞分散开，倒置显微镜下观 X 察，然后用1640培养液将细胞稀释为5105个／ml的细胞悬液，接 种于24孔培养板，lml／孔，在其培养条件下继续培养，待细胞长满 单层，即可用于实验。 x 1．L 105mol／L 2姜黄提取物用少许二甲亚砜(DMSO)溶解配成1 的母液，．20℃冻存备用，临用时用完全培养基稀释至所用浓度， DMSO的含量小于0．1％。 中文摘要 u 3分组：实验时共分为五组，分别为：对照组、模型组、20 1．t 1．t mol／L姜黄提取物组、40 mol／L姜黄提取物组、80mol／L姜黄提 取物组。 4姜黄提取物对SK-N．SH细胞谷氨酸(Glu)损伤保护的影响 铺满单层的24孔培养板，吸弃原培养液，用D．Hank，s液洗1次， 每孔加入1640培养液lml，再加入姜黄提取物进行预保护，使其终 pmol／L、40ljlmol／L、80la 浓度分别为20 mol／L，培养lh后加入 Glu，使其终浓度为500 不加Glu损伤。 5观察指标： 5．1形态学观察 倒置相差显微镜下观察各组SK-N-SH细胞生长及形态的变化。 5．2MTT法细胞存活力测定 9继续培养3小时，吸去培养液，每孔加入 MTT(终浓度0．5mg／ml 板内，用酶标仪(入甜92衄)测定其光密度值(OD)。 5．3乳酸脱氢酶(LDH)活性测定 按上述损伤发生继续培养16h后，收集培养上清液，按试剂盒 说明书测定LDH的活性。 影响 按上述损伤发生取培养16h后，收集培养上清液，按试剂盒说 明书测定SOD、MDA含量口 7姜黄提取物对Glu损伤SK-N．SH细胞培养后细胞凋亡的影响 7．1采用Westernblot检测法检测Bcl．2、Bax蛋白的表达情况。 mRNA、Bax 7．2采用RT-PCR法检测Bel．2mRNA的表达水 平。 结果： umol