2013-2014学年高二生物（中图版选修1）学案：第四章第2节《分子生物学技术》.docVIP

第43讲　生物化学与分子生物学技术实践 [考纲要求]　1.蛋白质的提取和分离。2.PCR技术的基本操作和应用。3.从生物材料中提取某些特定的成分。 考点一　蛋白质的分离与纯化技术[重要程度：] 1． 纯化原理 蛋白质之间以及蛋白质与其他物质之间在分子大小、溶解度、所带电荷的多少、吸附性质等方面存在差异。 2． 纯化方法 (1)薄膜透析法 ①原理：蛋白质水溶液具有亲水胶体溶液性质，不能透过半透膜。 ②目的：去除小分子化合物杂质，如无机盐、单糖、双糖、氨基酸等。 ③常用的半透膜：肠衣、玻璃纸。 ④步骤：将待纯化的蛋白质溶液装入透析袋内，再把透析袋放入透析液中即可。 (2)离心沉降法 ①原理：在离心力的作用下，分子大小、密度不同的分子沉降速度不同，从而被分离。 ②目的：使分子大小、密度不同的不同种类的蛋白质彼此分离。 (3)电泳 ①概念：带电颗粒在电场作用下向着与其电性相反的电极移动的现象。 ②原理：不同的物质所带电荷不同，颗粒的大小、形状不同，因此，在电场中的泳动速度不同。 ③影响泳动的因素：带电颗粒的性质，即颗粒的大小、形状和所带净电荷的多少；此外还有电场强度、溶液的pH等因素。 ④泳动特点：带电颗粒直径越小，越接近于球形，所带净电荷越多，则在电场中的泳动速度越快；反之，则越慢。 ⑤支持物：滤纸、醋酸纤维薄膜、大分子凝胶等。 1． 薄膜透析法 (1)过程：取1 mL的血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋放入盛有300 mL的物质的量浓度为20 mmol/L的磷酸缓冲液中(pH为7.0)，透析12 h。 (2)图示： 2． 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳 (1)血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳流程 (2)结果及其分析 ①结果 ②结果分析 从电泳图谱示意图中可以看出：a.血清蛋白主要包括五种蛋白质，且含量最多的是清蛋白，其他依次是：γ-球蛋白α1-球蛋白α2-球蛋白β-球蛋白； 由五种蛋白质所处的位置可判断出它们均带有负电荷，且四种球蛋白的电量大小依次为：α1-球蛋白α2-球蛋白β-球蛋白γ-球蛋白。 1． 仔细观察下图，所带负电荷少的球蛋白是(　　) A．α1-球蛋白 B．α2-球蛋白 C．β-球蛋白 D．γ-球蛋白 答案　D 解析　对于几种球蛋白来说直径相差不大，引起泳动速度的差异主要来自于所带电荷多少，由图可知球蛋白由右向左泳动，因右侧为负极，且γ-球蛋白距点样处最近，所以γ-球蛋白所带负电荷最少。 2． 关于蛋白质提取的叙述中，不正确的是(　　) A．分离与纯化蛋白质之前首先要用适当的方法使蛋白质释放出来 B．抽提时要依据蛋白质的不同特性选择不同的溶剂 C．蛋白质的粗提取物离心可除去一些小分子杂质 D．蛋白质的粗制品可能是多种蛋白质的混合物 答案　C 解析　对抽提得到的粗提取物离心可除去固体杂质。考点二　从生物材料中提取某些特定成分[重要程度：] 1． 植物芳香油的基本知识 (1)来源：芳香油是植物在代谢中的产物。 (2)特点：具有很强的挥发性，易溶于有机溶剂。 (3)应用：玫瑰精油是制作高级香水的主要成分，能使人产生愉悦感；橘皮芳香油的主要成分是柠檬烯，具诱人的橘香味，是生产食用香精、化妆品香精和医药香精的优质原料。 2． 橘皮精油的提取流程与关键 石灰水浸泡→漂洗→压榨→过滤→静置→再次过滤→橘皮精油 (1)橘皮的处理：干燥后一定要用石灰水浸透，时间至少10 h以上。 (2)压榨液的处理：可以先用普通布袋过滤除去固体物和残渣，然后离心进一步除去质量较小的残留固体物，再用分液漏斗或吸管将上层的橘皮精油分离出来。 植物芳香油提取方法的比较 提取方法 水蒸气蒸馏法 压榨法 萃取法 实验原理 利用水蒸气将挥发性较强的植物芳香油携带出来 通过机械加压，压榨出果皮中的芳香油 使芳香油溶解在有机溶剂中，蒸发溶剂获得芳香油 方法步骤 ①水蒸气蒸馏 ①石灰水浸泡、漂洗 ①粉碎、干燥 ②分离油层 ②压榨、过滤、静置 ②萃取、过滤 ③除水过滤 ③再次过滤 ③浓缩 适用范围 适用于提取玫瑰油、薄荷油等挥发性强的芳香油 适用于柑橘、柠檬等易焦糊原料的提取 适用范围广，要求原料的颗粒要尽可能细小，能充分浸泡在有机溶剂中 优点 简单易行，便于分离 生产成本低，易保持原料原有的结构和功能 出油率高，易分离 局限性 水中蒸馏会导致原料焦糊和有效成分水解等问题 分离较为困难，出油率相对较低 使用的有机溶剂处理不当会影响芳香油的质量 易错警示　(1)植物芳香油的提取方法主要有水蒸气蒸馏法、压榨法、萃取法。水蒸气蒸馏是植物芳香油提取的常用方法，但会导致原料焦糊或有效成分水解等，若植物有效成分易水解，则不宜采用此法。玫瑰精油、橘皮精油、胡萝卜素的提取分别采用水蒸气蒸馏法、压榨法、萃取法。 (2)水蒸气蒸馏可用明火加热，萃取过程应该避免明火加热，采取水浴加