斑马鱼视神经损伤后视网膜和顶盖系统BCL2基因的表达.pdfVIP

斑马鱼视神经损伤后视网膜和顶盖系统BCL-2 基因 的表达 郭蕴郦，王子仁 兰州大学生命科学学院发育生物所，甘肃兰州（730000 ） E-mail ：guoyunli1@ 摘 要：利用荧光定量PCR 技术测定斑马鱼（Brachydanio rerio ）视神经损伤后凋亡抑制基 因 1 Ｂcl- 2 的表达，以便确定斑马鱼视神经再生所需的周期。结果发现：斑马鱼视神经再生 过程中在不同实验时间点Bcl-2 基因的表达差异明显，从损伤视神经后 1-7 d 的低表达，到 损伤视神经后30 d 基本恢复到正常水平。这表明斑马鱼在损伤视神经后的再生过程中，可 以利用细胞凋亡相关基因的表达变化进行视神经再生周期的确定。并发现Bcl-2 基因在顶盖 和视网膜损伤后5 d 均大量表达，顶盖中更是达到了峰值，稍早于视神经再生回其上行和下 行靶组织的时间。推测可能是由于神经胶质细胞的作用，提前抑制了靶组织的细胞凋亡，从 而为神经再生回靶组织提供条件。 关键词：视神经再生；视网膜；顶盖；免疫荧光定量PCR （FQ-PCR ）；Bcl-2 中图分类号：Q189 1．引言 凋亡作为一种生命现象，具有维持正常组织器官平衡稳定及组织器官损伤后修复的作 用。大量的动物实验表明凋亡是视网膜神经节细胞死亡的重要机制之一[1] 。鱼类和两栖类的 视神经作为外周神经系统的一部分，具有再生的能力[2] 。已知视神经的损伤对与视神经纤维 直接相连的视网膜神经节细胞的形态学变化，以及与视神经再生相关的蛋白质的合成等产生 [2] [2] 影响 。同时，在神经网络中，对其上行系统也具有一定的跨神经元的影响 。这种影响不 只反应在组织结构的变化水平上，更重要的是在分子水平的改变。 细胞凋亡是细胞的一种基本生物学现象，在多细胞生物去除不需要的或异常的细胞中 起着必要的作用。它在生物体的进化、内环境的稳定以及多个系统的发育中起着重要的作用。 细胞凋亡不仅是一种特殊的细胞死亡类型，而且具有重要的生物学意义及复杂的分子生物学 机制。 凋亡是多基因严格控制的过程。在这些基因中，BCL-2家族起着重要的作用。这一 家族有众多成员，如Mcl-1 、NR-B 、A1 、Bcl-w 、Bcl-x 、Bax 、Bak 、Bad 、Bim等，它们分别 既有抗凋亡作用，也有促凋亡的作用。多数成员间有两个结构同源区域，在介导成员之间的 二聚体化过程中起重要作用。Bcl-2成员之间的二聚体化是成员之间功能实现或功能调节的 重要形式。Bcl-2 生理功能是阻遏细胞凋亡，延长细胞寿命。Bcl-2 的亚细胞定位已经明确， 它在不同的细胞类型可以定位于线粒体、内质网以及核膜上，并通过阻止线粒体细胞色素C 的释放而发挥抗凋亡作用。此外，Bcl-2具有保护细胞的功能，Bcl-2 的过度表达可引起细胞 [3] 核谷胱苷肽（GSH ）的积聚，导致核内氧化还原平衡的改变，从而降低了Caspase的活性 。 本实验采取探针法荧光定量PCR技术，以斑马鱼（Brachydanio rerio ）为材料，在分子 水平检测Bcl-2基因的表达，来观测损伤视神经对视网膜和顶盖系统细胞凋亡的影响。 2. 材料与方法 2.1 材料 1本课题得到国家自然科学基金项目（No）的资助。 - 1 - 选取成年斑马鱼（Brachydanio rerio ）体长2.5 cm左右，雌雄不论，自花鱼市场购回后在 实验室进行2周以上饲养之后进行实验。 取正常发育的成年斑马鱼，5‰ Finquel (tricain methanesulfonate)麻醉剂麻醉后，用眼科 镊在眼球底部位置夹断视神经，苏醒后继续实验室饲养，直到实验取材。 分别于视神