2015-2016学年高二生物习题：专题5 DNA和蛋白质技术 课题3《血红蛋白的提取和分离》(人教版选修1).docVIP

课题3　血红蛋白的提取和分离 一、凝胶色谱法——血红蛋白的分离方法 1．概念 凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法，也称作分配色谱法。 2．原理 (1)凝胶 (2)分离原理： ①相对分子质量较小的蛋白质：容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢，通过凝胶柱的时间较长。 ②相对分子质量较大的蛋白质：无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快，通过凝胶柱的时间较短。 二、缓冲溶液 1．作用 在一定范围内，缓冲溶液能够抵制外界的酸和碱对溶液pH的影响，维持pH基本不变。 2．配制 通常由1～2种缓冲剂溶解于水中配制而成，调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同pH范围内使用的缓冲液。 三、电泳——血红蛋白的分离或鉴定方法 1．概念 带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。 2．原理 (1)许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团会带上正电或负电。 (2)在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。 (3)电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。 四、蛋白质的提取和分离过程 　蛋白质的提取和分离一般分为四步：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。 一、选择题 1．使用凝胶色谱法分离蛋白质实验中，相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的行进过程，可表示为下图中(B) 解析：凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。相对分子质量较小的蛋白质能进入凝胶内部通道，路程较长，移动速度较慢；相对分子质量大的蛋白质，路程较短，移动速度较快，首先洗脱出来。 2．使用SDS—聚丙烯酰胺电泳的过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于(B) A．电荷的多少 B．分子的大小 C．肽链的多少 D．分子形状的差异 解析：SDS能与各种蛋白质形成蛋白质SDS复合物，SDS所带的负电荷量大大超过蛋白质分子原有的电荷量，因而掩盖了不同蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于分子的大小。 3．在血红蛋白的整个提取过程中，不断用磷酸缓冲液处理的目的是(D) A．防止血红蛋白被氧气氧化 B．血红蛋白是一种碱性物质，需磷酸中和 C．磷酸缓冲液会加速血红蛋白的提取过程 D．让血红蛋白处在稳定的pH范围内，维持其结构和性质 解析：磷酸缓冲液的作用是稳定pH，从而维持血红蛋白的结构和性质。 4．蛋白质的分离与纯化是蛋白质研究的重要技术。下列有关叙述不正确的是(A) A．根据蛋白质分子不能透过半透膜的特性，可将样品中各种不同的蛋白质分离 B．根据蛋白质所带电荷性质的差异及分子大小等，可通过电泳分离蛋白质 C．根据蛋白质相对分子质量的大小，可通过凝胶色谱法分离蛋白质 D．根据蛋白质的分子大小、密度不同，可通过离心沉降法分离蛋白质 5．在提取血红蛋白的样品处理阶段，洗涤红细胞十分重要，其目的是(B) A．让红细胞破裂，释放血红蛋白 B．洗去血浆蛋白 C．防止血液凝固 D．保证红细胞的正常形态 解析：血液中含有多种蛋白质，除红细胞内的血红蛋白，血浆中还含有多种蛋白质，这些蛋白质在血红蛋白释放出后会与其混合，需要在红细胞破裂前将其除去。 6．蛋白质提取和分离分为哪几步(C) A．样品处理、凝胶色谱操作、SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳 B．样品处理、凝胶色谱操作、纯化 C．样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定 D．样品处理、纯化、粗分离、纯度鉴定 解析：蛋白质的提取和分离分为样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定四步。A中凝胶色谱操作及SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳为实验操作过程中的技术。 7．下列对凝胶电泳的相关认识，错误的是(A) A．蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶电泳中的迁移率只取决于分子的大小 B．蛋白质在SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳中的迁移率完全取决于分子的大小 C．SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳不仅用于蛋白质相对分子质量的测定，还可用于蛋白质混合组分的分离 D．凝胶中加入SDS可以消除净电荷对迁移率的影响 解析：SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳中蛋白质分子所带的负电荷远远超过天然蛋白质分子的负电荷，消除了不同蛋白质分子的电荷效应，使蛋白质分子相对迁移率的大小完全取决于相对分子质量的高低。 8．在血红蛋白的提取和分离实验中，下列操作正确的是(A) A．分离红细胞时需去除上层透明的黄色血浆 B．红细胞释放出血红蛋白时只需加入蒸馏水 C．分离血红蛋白溶液是低速短时间离心 D．洗脱时，待红色蛋白质下移即开始收集流出液 解析：分离红细胞时要及时除去血浆蛋白。释放红细胞时需要加入蒸馏水和甲苯。分离血细胞时，要短时低速离心，即一般为500 r/min，离心2 min，否则白细