高效产甲烷复合系的构建及应用研究.pdf

Classified Index: CODE: 10075 U.D.C.: NO A Dissertation for the Degree of M.Science Construction of Composite Microbial System on Efficient Methanogens and Applied Research Candidate: Ma Jinliang Supervisor: Prof. Wang Hongwei Associate Researcher Cheng Huicai Academic Degree Applied for : Master of Science Specialty: Hydrobiology University: Hebei University Date of Oral Examination: June, 2012 摘 要 摘 要 沼气发酵是一个由多种微生物参与、联合作用的复杂生化反应过程，是产甲烷菌和 非产甲烷菌等多种微生物生长的动态平衡过程。产甲烷菌是该过程中的关键微生物，对 沼气的产量和质量起着决定性作用。我国目前沼气生产多为自然接种，存在产气率低、 产气不稳定、低温条件下沼气池利用率低等问题。因此，通过筛选性状优良、适于进行 沼气生产的产甲烷菌，研究其生理生化特性和分类地位，确定影响其生长的各种因素， 并通过自然以及人工构建高效沼气复合微生物菌系，最后应用于沼气生产，具有重要的 意义。该研究不仅可以丰富产甲烷古菌菌种资源，所构建的复合菌系对增强沼气发酵各 阶段微生物类群的活性，提高沼气产气效率和稳定性有极大的实用价值。 本实验采用改良的 Hungate 厌氧分离技术，从承德塞罕坝湿地污泥、石家庄污水处 理厂等不同厌氧生境中分离到三株产甲烷菌，分别为菌株 SHB、菌株AG 和菌株 QDW， 经形态、生理生化特性和 16S rDNA 序列分析确定其分类地位和生长特性。菌株 SHB 和 AG 属于产甲烷杆菌属（Methanobacterium sp. ）；菌株 SHB 适宜生长温度范围为 16-40ºC，适宜pH 为 6.0-9.0，在 0-5%盐浓度范围内能够生长，能够利用 H2/CO2 和甲酸 钠；菌株 AG 最适生长温度为 37ºC，最适 pH 为 7.5-8.0，在 0-1%盐浓度范围内能够生 长，利用 H2/CO2 和甲酸钠生长；菌株 QDW 属于甲烷袋状菌属（Methanoculleus sp. ）， 最适生长温度为37ºC，最适 pH 为7-7.5，不具有耐盐性，能够以甲酸钠、乙酸钠和 H2/CO2 为底物生长。对这三株菌的生理特性进行了比较，菌株 SHB 的生长温度和pH 范围较宽， 耐盐性和比生长率较高，将其用于构建复合菌系。 沼气发酵仅靠一种或少数几种菌培养物很难从整体上对沼气发酵进行调控。因此， 分别在不同温度下对各样品进行富集驯化和组配，将其中几个效果较好的复合菌系与菌 株 SHB 进行组配，得到人工构建的中温复合菌系 C13、C14 和 B3 以及低温复合菌系 C2-1 和 C2-3 。中温复合菌系中，复合菌系C13、C14 和 B3 的产甲烷能力比组配前提高 了4.44% 、1.19%和 9.41%，复合菌系 C13 和复合菌系 B3 显著高于对照，复合菌系 C14 与对照差异不显著；低温复合菌系中，复合菌系 C2-1 比对照组（复合菌系B2-1 和菌株 SHB）的产甲烷能力高 5.74%和 4.82% ；复合菌系 C2-3 比对照组（复合菌系B2-3 和菌 株 SHB）分别高