平菇菌种液氮保藏技术的优化及其保藏效果鉴定.pdf

摘要 食用菌菌种保藏方法众多，其中液氮保藏是一种安全有效且能长期保藏菌种的 方法。但是液氮保藏过程中的降温方式、保护剂及解冻方式等环节都影响到菌种保 藏效果。为了更好地保存食用菌种质资源，需要系统研究菌种液氮保藏过程中的各 环节，并对保藏后的菌种进行保藏效果的鉴定，以期为菌种液氮保藏方法提供一定 的理论依据和技术支持。 本实验选择皖平菇1号和新平400的原种为实验材料，设计降温方式、保护剂 及解冻方式三因素三水平的正交试验，对高温型和低温型的两个平菇菌种的液氮保 藏技术进行比较系统的研究，并鉴定菌种的液氮保藏效果，主要测定菌丝体生长指 标、子实体形态学指标及产量、子实体粗蛋白以及可溶性糖含量、子实体酯酶同工 酶谱和S凡心分子标记分析，通过以上指标鉴定其遗传稳定性，以期找到平菇菌种 液氮保藏的适宜条件，也为其它菌种的液氮保藏提供一些有利的借鉴。主要结论如 下： (1)液氮保藏对皖平菇1号和新平400菌丝体生长指标影响最小的处理均为不 加保护剂直接将菌种放入液氮，38~40℃水浴快速解冻的条件组合。保护剂和解冻 方式是产生影响的两个主要因素，降温方式为次要因素； (2)液氮保藏对皖平菇1号子实体形态学指标、子实体产量产生影响最小的处 理组合均为AlBlC3，保护剂为主要影响因素；对新平400以上各指标影响最小的处 理均为A382C3，解冻方式为主要影响因素。 (3)液氮保藏对皖平菇1号和新平400子实体可溶性蛋白和可溶性糖含量的影 响不同。对皖平菇1号可溶性蛋白影响最小的处理为AlB2Cl，保护剂为主要影响因 素，对可溶性糖影响最小的处理为A1BlC3，解冻方式为主要影响因素；对新平400 子实体可溶性蛋白影响最小的处理为A3BlCl，降温方式为主要影响因素，对可溶性 糖影响最小的处理为A282Cl，保护剂为主要影响因素。 (4)液氮保藏对两个菌株遗传稳定性没有明显影响，子实体酯酶同工酶谱产生 A283C3和A1BlC2)的子实体DNASRAP扩增产物经电泳分析，部分引物出现少量 特异性条带，这可能是由于真菌本身变异性较大所致，也有可能是因为在液氮保藏 的过程中，低温环境导致了某些抗性基因的变化，这还有待于进一步探讨。 (5)液氮保藏后皖平菇1号酯酶同工酶谱平均每个处理出现2．9条不同的酶带， 新平400平均每个处理出现4．8条不同酶带，S凡廿分析皖平菇1号两个处理共出 现10条差异条带，新平400共出现23条差异条带。皖平菇1号两个处理出现的特 异性条带数在总条带中所占的比例分别为4％和1．8％，新平400两个处理分别为 11．7％和10．7％。所以，液氮处理后，高温型菌株皖平菇1号遗传稳定性比低温型菌 株新平400受影响小，而同一菌株的两个处理受影响情况相差不大。高温型平菇菌 种对液氮低温环境的抵抗力更强。 关键词：平菇，液氮保藏，正交试验，菌丝体，子实体，酯酶同工酶，S＆心分析 The o：f Preservation of 0ptimizationNi仃ogen Technology 尸彪甜加f姗Ds办℃口f螂and Identificationof Ef．fect preservation Abstract Presen，ationisoneoftlle LiquidNitrogen safeaIlde丑’ectivemetllodsofSp鲫m Presen，ationint11enumerous methodon call st】面11Sfor preseⅣation Edible如ngi，itkeep aIld are mreefactorsWhjchcaneffectme long-terIn．Cooling、cryoprotectall