动物实验基本操作.doc

　　　　　　　　　动物实验基本操作 ［实验目的］ 熟悉家兔的颈部解剖、颈部神经的识别与分离、动脉插管及蟾蜍坐骨神经－腓肠肌标本的制备。 ［实验原理］ 生理实验中经常用家兔和蟾蜍作为实验对象。 ［实验对象］ 家兔　蟾蜍 ［实验步骤］ 一、坐骨神经－腓肠肌标本制备 ⒈破坏脑脊髓　左手握住蟾蜍，用食指下压口吻端使头前俯，右手持脑脊髓穿刺针从枕骨大孔垂直刺入，再向前刺入颅腔，左右搅动捣毁脑组织；然后将针退至皮下，再将针尖向后刺入脊髓管捣毁脊髓。 ！判断脑脊髓破坏成功的标准　四肢肌肉松软，呼吸消失。 ⒉剪除躯干上部及内脏　先用手确定骶髂关节的体表投影，然后左手握住脊柱下端，右手持粗剪刀在骶髂关节水平以上２～３cm处剪断脊柱，此时蟾蜍头与内脏自然下垂。沿脊柱两侧剪开侧腹壁至大腿根部，剪除全部下垂的头及内脏。 ！注意勿损伤脊柱两侧的坐骨神经。 ⒊剥皮　用左手持大镊子夹住脊柱的断端，右手捏住背部皮肤边缘，向下剥掉全部后肢的皮肤。 ！注意保护脊柱两侧的坐骨神经束，镊子不要夹住坐骨神经。 ⒋将标本放入盛有任氏液烧杯中，洗净手及用过的剪刀、镊子等全部手术器械。 ⒌分离两腿　将标本放在蛙盘上，用粗剪刀将腹侧耻骨联合及背侧骶骨突起的部位剪平，沿正中线将两侧大腿分离。 ！注意不可剪歪，以防坐骨神经损伤。 ⒍制作坐骨神经－腓肠肌标本 ⑴取一只腿腹侧向上固定于蛙盘上，用玻璃针沿脊柱侧将坐骨神经根游离。 ⑵将标本背侧向上固定，用玻璃针在大腿背侧循坐骨神经沟（股二头肌和半膜肌之间的裂隙）中找到坐骨神经后分离清楚。 ⑶用玻璃针在大腿根部沿神经的走行穿至腹侧，在确认玻璃针上面无坐骨神经后，用小剪刀将玻璃针上面的肌肉及结缔组织剪断暴露出整根坐骨神经。 ⑷再用粗剪刀在坐骨神经根部保留神经发出部的约１cm脊柱剪去其余部分，将坐骨神经游离。 ⑸用大镊子提起坐骨神经所连的脊柱块，用小剪刀剪断坐骨神经上的小分支将神经干游离至腘窝。 ⑹分离腓肠肌跟腱，用线结扎，并在结扎线的远侧剪断跟腱将腓肠肌游离至腘窝处，将游离干净的坐骨神经搭在腓肠肌上。 ⑺在膝关节周围剪掉全部大腿肌肉，并用粗剪刀将股骨下端刮干净。在膝关节以上１cm处剪断股骨，在膝下剪去胫骨。完成标本的制作。 ！尽量用器械操作，忌用金属器械触、夹神经。 ！操作过程中防止过度牵拉神经。 ！用任氏液保持神经湿润。 ⒎用浸有任氏液的锌铜弓迅速接触坐骨神经，如腓肠肌有快速收缩，表明标本兴奋性良好。 二、家兔颈部手术操作 ⒈麻醉并固定动物　用１％戊巴比妥钠３.０～３.５ml／kg的剂量从耳缘静脉注入。待动物麻醉后，背位固定于手术台上。 ！麻醉速度应该缓慢。 ⑴头部的固定　将麻醉完善的兔颈部放在半圆形铁圈上，再把嘴伸入可调铁圈内，最后将兔头夹的铁柄固定在实验台上。或用一根粗棉绳，一端拉住动物的两只上门齿，另一端拴在实验台的铁柱上。 ⑵四肢的固定　用粗棉绳的一端缚扎在踝关节的上部，前肢平直放在躯干两侧，将绑缚前肢的两根棉绳从背后交叉穿过，压住对侧前肢小腿，分别缚在手术台两侧的木钩上。两后肢左右分开，将棉绳的另一端分别缚在手术台两侧的木钩上。 ⒉分离颈部神经和血管 ⑴剪去颈部的毛，沿正中线做一个５～７cm的皮肤切口。 ⑵分离皮下组织和肌肉，暴露气管。 ⑶于气管两侧找到颈总动脉、迷走神经、颈交感神经和减压神经。其中迷走神经最粗，交感神经其次，减压神经最细。 ！忌用金属器械触、夹神经。 ！分离时不要过度牵拉，并随使用生理盐水湿润。 ⑷在减压神经及迷走神经下分别穿线备用。分离颈总动脉，下穿两条线备用。 ⒊动脉插管 ⑴静脉注入１０００单位／kg肝素以抗凝。 ⑵在左侧颈总动脉的远心端结扎，在近心端夹一动脉夹阻断血流。 ⑶用小剪刀在结扎线的近心端剪一斜向近心端的小口，向心脏方向插入动脉插管，用备好的线结扎固定。 ⒋气管插管　在气管下穿线，于甲状软骨下１～２个环状软骨间用粗剪刀剪开气管的一半，并向上方做一纵切口，使切口成倒“Ｔ”形。插入气管插管，并用备好的线固定。 ［课堂讨论］ ⒈如何判断麻醉的效果？ 答：最佳麻醉深度的指标：皮肤夹捏反应消失；头颈及四肢肌肉松弛，动物卧倒；呼吸深慢而平稳；瞳孔缩小；角膜反射明显迟钝或几乎消失。 ⒉动物麻醉过程中常会出现什么问题？应如何处理？ 答：如麻醉剂量掌握不准，常会出现麻醉过浅或麻醉过量。 ⑴麻醉过前时，动物出现挣扎、呼吸急促及鸣叫等反应，此时可补充麻醉药，但一次补充注射剂量不宜超过总量的五分之一。 ⑵麻醉过量时动物可出现呼吸慢深而不规则，甚至呼吸停止、血压下降、心跳微弱或停止。 ⒊处死动物的方法有哪些？ 答：⑴用注射器向动物的静脉或心脏内注入空气，使其发生气拴。 ⑵结扎气管，造成窒息而亡。 ⑶也可根据不同的实验情况采用大动脉放血，停止人工呼吸（开胸动物）或切断脑干（以暴露脑的动物）。 ⒋如何分离神经、血管？注意事项有