《亲和层析研究进展》.pdf

276 Ion Exchange and Adsorption 2001 年6 月 离子交换与吸附, 2001, 17(3): 276 ~ 280 ION EXCHANGE AND ADSORPTION 文章编号:1001-5493(2001)03-0276-05 亲和层析研究进展* ** 陈 勇 徐 燚 应汉杰 欧阳平凯 南京化工大学制药与生命科学学院 南京 210009 摘要: 亲和层析具有高选择性 高活性回收率和高纯度等特点已成为纯化蛋白质等生物大分子 最有效的技术之一 本文综述了亲和层析的类型 配基的种类 选择方法以及亲和层析技术 的最新研究进展 重点介绍了多肽作为亲和配基的制备及筛选方法及其在生物大分子中的应 用 并比较了不同亲和层析方法的优缺点及其发展趋势 关键词: 亲和层析 配基 研究进展 中图分类号: O652.6 文献标识码: A 随着现代生物技术的快速发展 天然存在的极微量有用的生物物质得以通过细胞 (微生物 植物 动物细胞) 培养进行大规模生产 生物工程产品的分离纯化有极严格的步骤 特别是对于药物蛋白必须 具有完全的生物活性 且要满足医疗应用的特殊要求 由于生物大分子自身的特殊性和复杂性 如热稳 定性差 对环境的 pH 值 有机溶剂 某些无机载体和金属离子很敏感 因此欲高效分离纯化存在于相 当大体积的组织匀浆或发酵液中的极少量目标产物 同时又混有大量理化性质相仿的其它生物活性物质 时 仅根据理化性质不同设计分离纯化工艺已远不能满足生物技术发展的需要 这时就必须从生物亲和 作用力的角度进行研究 而亲和技术正是在此背景下产生的 亲和层析技术的最大优点在于 利用它从 粗提液中经过一次简单的处理便可得到所需的高纯度的活性物质 该技术不但能用来分离一些在生物材 料中含量极微的物质 而且可以分离那些性质十分相似的生化物质 利用亲和层析技术成功地分离了单 [1] 克隆抗体 人生长因子 细胞分裂素 激素 血液凝固因子 纤维蛋白溶酶 促红细胞生长素等 产品 因此可以说 亲和层析技术是目前分离纯化药物蛋白等生物大分子最重要的方法之一 1 亲和层析的类型 亲和层析是利用生物活性物质之间的特异亲和力 使目标产物得以分离纯化的液相层析法 亲和层 析可应用于任何两种有特异性相互作用的生物大分子 如酶与底物 (包括酶的竞争性抑制剂和辅助因 子) 抗原与抗体 激素与受体 核酸中的互补链 多糖与蛋白复合体等 正是因为利用的是生物学特异 性而不是依赖于物理化学性质 因而非常适合于分离低浓度的生物产品 当预分离的料液通过层析柱时 样品中对配基有亲和力的物质便借助静电作用 疏水作用 金属配位作用 氢键作用和弱共价键作用 以及结构互补效应等作用吸附到固相载体上 根据配基与生物大分子作用体系不同 可以把亲和层析分 为以下四种类型 * 收稿日期: 2000 年6 月 18 日 项目基金:国家自然科学基金 (No. 作者简介:陈 勇, 男(1976-), 河南省人, 硕士研究生. ** 通讯联系人 万方数据 第17 卷第3 期 离 子 交 换 与 吸 附 277 1.1 生物亲和层析 BAFC 生物亲和层析是利用自然界中存在的生物特异性相互作用物质对的亲和层析 通常具有很高的选择 性 典型的物质对有酶 底物 酶 抑制剂 激素 受体等 通常酶的底物并不是合适的亲和配基 因 为它们易于转化成产物 而影响目的产物的分离 但是产物型化合物不会转化成底物 不存在这个问题 尽管酶与产物的结合能力要弱于它与底物的结合能力 但是在某些条件下产物型配基也能与酶强烈的相 互作用 因此 利用酶 产物型物质对更加有利于酶的纯化 另外 小分子量的竞争性抑制