2013版高考生物一轮精品复习专题5DNA和蛋白质技术学案新人教版选修1.docVIP

专题5 DNA和蛋白质技术 【高考新动向】 1、蛋白质的提取和分离 2、PCR技术的基本操作和应用 【考纲全景透析】 一、DNA的粗提取与鉴定 1、实验原理：(1)DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，在0.14 mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低。 (2)DNA不溶于酒精溶液。 (3)DNA不被蛋白酶所水解。 (4)DNA在沸水浴条件下可被二苯胺染成蓝色。 2．DNA与蛋白质在不同NaCl溶液中溶解度不同 3.DNA的析出与鉴定 (1)析出：将处理后的溶液过滤，加入与滤液等体积的冷却酒精溶液(体积分数为95%)静置2～3 min，溶液中会出现白色丝状物(此即粗提取的DNA)，用玻璃棒沿一个方向搅拌卷起丝状物。 (2)鉴定 二、多聚酶链式反应扩增DNA片段 1、PCR：多聚酶链式反应的简称，是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。 原理：DNA的热变性 2、PCR反应过程 （1）变性：当温度上升到90℃以上时，双链DNA解聚为单链 （2）复性：温度下降到50℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合 （3）延伸：温度上升到72℃左右时，溶液中的4种脱氧核苷酸（A,T,C,G）在DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。 3、PCR结果：DNA聚合酶只能特异地复制处于两个引物之间的DNA序列，使这段固定长度的序列呈指数扩增。 三、血红蛋白的提取和分离实验 1、方法及原理 方法 原理 凝胶色谱法 根据相对分子质量的大小分离蛋白质 电泳法 各种分子带电性质的差异以及分子本身大小、形状的不同来分离蛋白质 2、操作程序： （1）样品处理： 红细胞的洗涤→血红蛋白的释放→分离血红蛋白溶液 （2）粗分离——透析：除去样品中相对分子质量较小的杂质。 （3）纯化：一般采用凝胶色谱法对血红蛋白进行分离和纯化。 （4）纯度鉴定：一般用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法来测定蛋白质的分子量，即对血红蛋白进行纯度鉴定。 3、细胞内DNA复制与PCR技术的比较 细胞内DNA复制 PCR 不同点[ 解旋 在解旋酶作用下边解旋边复制 80℃~100℃高温解旋，双链分开 酶 DNA解旋酶、DNA聚合酶 TaqDNA聚合酶 引物 RNA DNA或RNA 温度 体内温和条件 高温 相同点 （1）需提供DNA复制的模板 （2）四中脱氧核苷酸作原料 （3）子链延伸的方向都是从5ˊ端到3ˊ端 （4）都需要酶的催化 【热点难点全析】 一、DNA和蛋白质的技术 1、比较细胞内DNA复制与DNA扩增（PCR） 2.血红蛋白的提取和分离方法 (1)凝胶色谱法 ①含义：根据相对分子质量的大小分离蛋白质的方法。 ②原理 a.相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢。 b.相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。 (2)电泳法 ①含义：带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。 ②原理：利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异和分子本身大小、形状不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。 (3)缓冲溶液 ①组成：1～2种缓冲剂溶解于水中配制而成。 ②作用：在一定范围内抵制外界的酸和碱对溶液pH的影响，维持pH基本不变，确保实验室条件下能准确模拟生物体内的代谢过程。 【高考零距离】 1、（2012·江苏高考）下列关于“DNA 粗提取与鉴定实验”的叙述，正确的是（ ） A. 洗涤剂能瓦解细胞膜并增加 DNA 在 NaCl 溶液中的溶解度 B. 将 DNA 丝状物放入二苯胺试剂中沸水浴后冷却变蓝 C. 常温下菜花匀浆中有些酶类会影响 DNA 的提取 D. 用玻棒缓慢搅拌滤液会导致 DNA 获得量减少 【解析】洗涤剂能够瓦解细胞膜，但不能增加DNA的溶解度，A错；将 DNA 丝状物放入二苯胺试剂中沸水浴中变蓝，不需要冷却，B错；常温下菜花匀浆中有些酶类可破坏DNA，而影响DNA的提取，C正确；用玻棒缓慢搅拌滤液并不影响DNA的含量，而在粗提取时，缓慢撑拌有利于DNA附着，D错 【答案】C 2、（2011·江苏高考）在利用鸡血进行“DNA的粗提取与鉴定”的实验中，相关叙述正确的是() A.用蒸馏水将NaCl溶液浓度调至0.14 mol/L，滤去析出物 B.调节NaCl溶液浓度或加入木瓜蛋白酶，都可以去除部分杂质 C.将丝状物溶解在2 mol/L NaCl溶液中，加入二苯胺试剂即呈蓝色 D.用菜花替代鸡血作为实验材料，其实验操作步骤相同 【解析】A项，用蒸馏水将NaCl溶液浓度调至0.14 mol／L,使DNA析出。B项，NaCl溶液为2mol／L，过滤除去不溶的杂质，木瓜蛋白酶能够分解蛋白质。C项，在沸水浴的条件下，DNA遇二