强力霉素对脑缺血再灌注大鼠血脑屏障通透性影响机制的研究.pdf

·中文论著摘要· 强力霉素对脑缺血再灌注大鼠血脑屏障通透性的影响 及机制研究 刖 瞢 缺血性脑血管疾病发生后，迅速进行溶栓是治疗成功的前提和基础，但溶栓 brain 治疗容易引起脑水肿，甚至脑出血，其主要原因是由于血脑屏障(blood barrier，BBB)通透性增加，血脑屏障由脑微血管内皮细胞、星形胶质细胞、周细 胞、基底膜等成分组成，其中相邻内皮细胞间的紧密连接(tightjunction，TJ)是保 持血脑屏障完整性的重要功能单位，是决定血脑屏障通透性的主要因素。紧密连 接相关蛋白在紧密连接功能的调节中起重要作用，其在血管内皮细胞上的分布和／ 或表达水平影响紧密连接的开放或关闭。 强力霉素(Doxycyeline)是半合成的第二代四环素族抗生素，有良好的脂溶性， 能通过血脑屏障。强力霉素除具有广谱抗菌功能外，还有抑制小胶质细胞活化、 抑制自由基产生、减少细胞凋亡等作用，是有效的神经细胞保护剂。我们推测强 力霉素能够改善脑缺血再灌注大鼠血脑屏障的通透性，但这方面的研究尚未见报 、j厶 追o ． 基质金属蛋白酶(matrix 活，MMP．2、MMP．9能够降解脑血管基底膜和紧密连接相关蛋白，使血脑屏障通 透性增加。强力霉素能够抑制MMP．2、MMP．9蛋白表达和活性，但脑缺血再灌 注大鼠应用强力霉素后MMP．2、MMP-9的活性变化与血脑屏障的通透性关系有 待进一步证明。 蛋白激酶C(protein 化各种蛋白质底物上的丝氨酸或苏氨酸残基磷酸化。研究证明PKC6是脑缺血再灌 注损伤中被迅速激活的细胞内信号分子，对再灌注损伤引起的炎症反应、氧化应 激、细胞凋亡等进行调节。PKC8在缺血区脑微血管内皮细胞持续高表达，而在多 种内皮细胞都发现PKC8参与对紧密连接相关蛋白分布或表达的调节。 本研究利用脑缺血再灌注大鼠模型，腹腔注射强力霉素，研究脑缺血再灌注 120h#J，强力霉素对血脑屏障通透性的影响。 方法 1、大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的制备。 2、应用激光多普勒血流仪检测血流变化。 3、氯化三苯基四氮唑(2，3，5-triphenyltetrazoliumchloride，TTC)染色法检测 脑梗死体积百分比，观察脑组织损伤情况及强力霉素的保护效应。 4、伊文氏蓝(evansblue，EB)检测强力霉素对脑缺血再灌注血脑屏障通透性的 影响，透射电镜技术检测内皮细胞间紧密连接的状态。 5、免疫组织化学法检测强力霉素对脑缺血再灌注血脑屏障紧密连接相关蛋白 elaudin．5、occludin和ZO—1分布和表达的作用。 6、Western blot法检测强力霉素对脑缺血再灌注血脑屏障紧密连接相关蛋白 MMP．9、PKC6蛋白表达变化。 7、明胶酶谱法检测强力霉素对脑缺血再灌注脑组织MMP．2、MMP．9活性的 影响。 9士 甲 当口7R 1、脑缺血再灌注72h、120h，应用强力霉素使大鼠脑梗死体积显著降低。 密连接开放，血脑屏障通透性显著升高，应用强力霉素大鼠未见紧密连接开放， 强力霉素使血脑屏障通透性显著下降。 升高，并沿脑微血管分布明显增多。 4、脑缺血再灌注3h、120h，缺血区脑组织MMP．2蛋白表达和活性显著升高， 2 脑缺血再灌注12h、72h，缺血区脑组织MMP．9蛋白表达和活性显著升高，强力 霉素显著抑制了缺血再灌注引起的MMP．2、MMP．9蛋白的表达和活性上调。 高，强力霉素显著抑制缺血再灌注引起的PKC8蛋白表达上调。 讨论 本实验结果显示在脑缺血再灌注3h、12h、72h、120h，血脑屏障通透性显著 升高，脑微血管内皮细胞间部分紧密连接开放，紧密连接相关蛋白claudin-5、 occludin、ZO．1表达显著降低，沿脑微血管分布明显减少。强力霉素能