重组人卵透明带蛋白3(rhZP3)生物活性的研究.pdf

摘 要 ， 卵透 明带 是 当今 生 殖 研 究 中 的一 个 热 点 但 天 然 卵透 明带 的来 源 稀 缺 影 响 了对 它 的研 究和 应 用 。 分 子 生 物 学 研 究者 利 用 基 因 工 程 技 术 重 组 人 卵透 明带 蛋 白及 其 肤 ， 。 段 以期 为 生 殖 研 究带 来 新 的前 景 本 研 究通 过 两 方 面 的实验 一 一 顶 体 诱 发 实验 以 及 精 卵 结 合 实验 来 测 试 重 组 人 卵透 明带 蛋 白 一 ， 的生 物 活 性 ， 为 以后 的抗 生 育和 不 育 诊 断试 剂研 究提 供初 步依 据 。 分 别 用 空 白培 养 液 ， 含 孕 酮 的培 养 液 以及 含 有 不 同浓 度 的 的培 养 液 对 人 精 子 进 行 顶 体 诱 发 实验 ， 并 且 用 考 马 斯 亮 蓝 染 色 法 对 顶 体 状 态 进 行 评 价 。 精 卵 结 合 实验 分 两 部 分 进 行 用 不 同浓 度 的 以及 空 白培 养 液 分 别 处 理 同一 份 精 子 ， 然 后 再 与 卵 子 进 行 结 合 实验 ， 观 察 经 过 不 同处 理 的精 子 在 精 卵 结 合 中 的情 况 另 一 方 面 ， 用 分 离提 纯 的 免疫 新 西 兰 大 白兔 ， 制 备 抗 血 清 ， 用 不 同浓 度 的 抗 血 清 与 阴性 血 清 分 别 处 理 来 源 相 同 的 卵 子 ， 再 各 自与 同一 份 精 子 进 行 结 合 实 验 ， 观 察 经 过 不 同处 理 后 的卵 子 在 精 卵 结 合 中 的情 况 。 由于 人 卵 来 源 的 限制 ， 本 研 究 采 用 了小 鼠作 为 辅 助 研 究模 型 来 探 讨 对 精 卵 结 合 的影 响 。 同 时利 用 免 疫 组 织 化 学 技 术 ， 用 正 常 人 卵巢 切 片 与 抗 血 清 进 行 反 应 ， 观 察 即 抗 血 清 对 卵 巢 的影 响 。 研 究结 果 表 明 ， 在 诱 发 顶 体 反 应 实验 中， 处 理 组 与 空 白对 照 组 之 间 差 显 ，而 且 生 的 而 。 证 能 异 著 顶 体 发 率 随 浓 度 增 加 升 高 初 步 实 诱 发 人 精 子 发 生 顶 体 反 应 ， 并且 在 一 定 浓 度 范 围 内顶 体 发 生 率 与 浓 度 成 正 相 关 。 精 卵 结 合 实验 结 果 显 示 各 实验 组 和 对 照 组 之 间存 在 显 著 性 差 异 。 和 ， 抗 体 能够 在 一 定浓 度 内抑 制 人 和 小 鼠的精 卵 结 合 且 这 种 抑 制 程 度 是 随着 浓 度 的增 大 而 增 加 的。 在 同样 的实验 中， 以及 抗 抗 体对 人 类 精 卵结 合 的抑 制 明显 大 于 对 小 鼠精 卵 结 合 的抑 制 。 免 疫 组 织 化 学 结 果 显 示 ， 抗 体 与 卵巢 组 织 切 片 显 示 出 弱 阳性 。 实验 的 结 果 可 初 步推 断 具 有 天 然 卵透 明带 相 似 的活 性 ， 其抗 血 清 与 卵巢 反 应 性 很低 ， 为 以后 发 展 不 孕 不 育检 测 试 剂 和 避 孕 疫 苗提 供 了体 外 实验 的证 据 。 关 键 词 重 组 卵透 明带 蛋 白 ， 顶 体 反 应 ， 精 卵 结 合 ， 避 孕 疫 苗