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高考生物必记知识点 新人教版 1.作为载体的条件 ①能在宿主细胞中稳定保存并大量复制。 ②有一个至多个限制性核酸内切酶切割位点，以便与外源基因连接。 ③具有特殊的标记基因，便于筛选 2.载体的作用 ①作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞内； ②利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。 3.DNA连接酶起作用时不需要模板。 4.限制酶在使用时的注意事项： ①切割目的基因和载体时，最好用同一种限制酶，以产生相同的黏性末端。 ②在切割含目的基因的DNA分子时，需用限制酶切割两次此DNA分子，产生4个末端。只有这样，目的基因两端都有可连接的黏性末端或平末端。 ③限制酶切割位点应位于标记基因之外，不能破坏标记基因，以便于进行检测。 5.未知序列的目的基因是无法从基因文库中获取的。 6.PCR技术扩增目的基因的过程：加热至90～95℃DNA解旋→冷却到55～60℃，引物结合到互补DNA链→加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。 7.基因表达载体的构建 (1)目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。 (2)组成：目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因。 基因工程中构建基因表达载体需要限制酶来切割以获取目的基因，同时需要相同的限制酶切割载体以获取与目的基因相同的黏性末端或平末端，再通过DNA连接酶连接目的基因和载体。 8