实验五 显微镜油镜的使用细菌的革兰氏染色及芽孢染色.ppt

1、选材 2、草图的绘制 3、定图与修饰 （二）生物绘图的一般步骤 选材典型，有明显特征，有代表性。选题材后，要对其作细心观察，对它形态、色彩、斑纹等，各部分关系，比例数据等特征，要有个完整概念。 1、选材 (1)合理布局，画面大小要适宜、层次要清楚 (2)重点突出，主次分明 (3)物体各部分比例要正确 (4)落笔要轻，线条简洁 (5)点要均匀，线条方向与角度要准确 2、草图的绘制 检查草图无误后，接着就是上墨或着色。在定图时，还要做结尾工作， 包括： (1)标示比例 (2)标题和注字 3、定图与修饰 本次实验的思考题 1、对上周自己接种在三支斜面上的菌株生长结果观察，并做出描述和评价。 2、对细菌的二种染色方法及观察结果，绘图并标注说明。 3、如何判断未知菌的革兰氏染色正确与否？ 4、用油镜观察时应注意哪些问题?在载玻片和镜头之间滴加香柏油起什么作用? 下周实验课的内容 微生物大小的测定及利用血球计数板测定微生物的数量 要点： 掌握微生物大小的测定原理和方法（包括测微尺的校正） 掌握血球计数板测定微生物数量的原理和方法（包括死活菌在显微镜下的观察区分——美兰染色法） 下次实验课内容 放线菌、霉菌个体形态的显微观察 要点： 放线菌形态的观察 （显微观察放线菌的三种菌丝形态特征） 霉菌的形态观察 （显微观察三种霉菌的形态结构特征） * 前面主要介绍了显微镜的具体参数和主要光学部件。下面内容将介绍日常使用中需要的一些基本调节。不管是什么型号或厂家的显微镜，这些调节都是必须的。如果没有正确的调节，即便非常高档的显微镜也不能达到应有的效果。 * 重要为了适应观察者瞳距的差异。图示为推拉式调节，目前高档显微镜都采用铰链式调节。 瞳距调节不好，会出现双眼视场不能重合成一个的现象。 * 屈光度的调节是为了克服双眼屈光度明显差异所造成的焦平面不一致的现象。如果屈光度调节不好，双眼焦平面不在同一个平面，长时间观察会引起眼睛疲劳甚至恶心头晕。 调节方法，用右眼聚焦看清标本，用左眼观察，如果有屈光度差异，则调节观察筒上的调节环（一般在观察筒左侧目镜下），直到双眼视野能够在同一焦平面并重合。 * 光路转换钮一般在观察筒的左侧，为拉杆式。在显微摄影中注意应用。 * 聚光镜中心的调节为柯拉照明方式必须的调节步骤，每次使用显微镜之前都应该进行一下中心的检查。如果聚光镜中心不正的话，会影响标本的照明效果，对观察和摄影都有影响。具体调节步骤： 1、用10倍物镜聚焦标本，缩小视场光阑，直到视野内出现光阑的边缘像。 2、如果不能看到光阑像，则用聚光镜上下调节钮调节聚光镜高度，直到光阑像清晰为止。次位置为柯拉照明方式要求的高度，确定后不要再调节高度。 3、用聚光镜中心调节钮，调节光阑像到视野中心的位置。 4、打开视场光阑到正好与视场外切的位置 * 要想达到物镜的最好观察效果还需要聚光镜与物镜相配合。 在聚光镜上同样有孔径光阑，可参照上面的公式将聚光镜孔径光阑调节到相应的位置。或者取下一个目镜从观察筒向内看，可看到聚光镜的光阑像，调节到图示的位置。则可以得到理想的显微图象。 理论上，应该每个物镜观察时都对聚光镜进行调节。 * 此图示意聚光镜孔径光阑开度不同时对图象的影响。 开度过大图象对比度减低，反而得不到理想的显微图象。开度过小，对比度提高，但分辨率降低。 * 奥林巴斯传统胶片相机在显微研究市场上已经取得的良好的业绩。 公司为了配合最新的研究需要又推出了多款适用于各种科学研究用的胶片相机和数码相机。 帮助使用者更方便的利用显微摄影技术，用更简单的操作方法拍出更漂亮的显微图片。 * Average size: 0.2 -1.0 μm ? 2 - 8 μm Basic shapes: Unusual shapes Star-shaped Stella Square Haloarcula Most bacteria are monomorphic A few are pleomorphic 实 验 内 容 二细菌的革兰氏染色 一、微生物染色的原理 微生物个体微小，在光学显微镜下，折光性较小，反差小，看不清，所以要进行染色； 染色剂的选择 具发色基团——共轭双键（有时需要助色基团） 可和细胞结合——离子键、共价键、疏水键等 染色剂的种类： 碱性染料——美兰、碱性品红、结晶紫、番红、孔雀石绿（氯化盐类） 酸性染料——伊红、玫瑰红、酸性品红（带-COOH、-OH） 一般情况下，微生物细胞带负电荷，可以和碱性染料电离的正电荷发色基团结合，从而细胞被着色。 二、微生物染色的方法 单染色——1种染料（着色和不着色） 复染色——2种以上染料（使不结构呈现不同的颜