蛋白质和多肽的PEG定点修饰的研究进展.docVIP

蛋白质和多肽的PEG定点修饰，袁勤生2PEG定点修饰研究进行归纳总结。结果与结论 PEG定点修饰有利于保持蛋白质或多肽的生物活性，随着材料科学、新的化学专一反应技术、蛋白质化学合成和重组技术的发展进步，以及准确快速灵敏的分析方法的建立，PEG定点修饰技术将具有更加广泛的适用性和广阔的发展前景。 关键词：PEG修饰；定点修饰；蛋白质和多肽 Research Progress in Site-Specific PEGylation of Protein and Peptide WANG Feng-shan1, ZHAO Ting1，YUAN Qin-sheng2 (1. School of Pharmaceutical Science, National Glycoengineering Research Center, Shandong University, Jinan 250012；2. School of Bioengineering, East China University Of Science And Technology, Shanghai 200237 ) 蛋白质或多肽的聚乙二醇(polyethylene glycol, PEG) 修饰即PEG化(pegylation)，是将活化的PEG通过化学方法以共价键偶联到蛋白质或多肽分子上。自1977年Davis首次采用PEG修饰牛血清白蛋白以来，PEG修饰技术迅速发展，并广泛应用于多种蛋白质和多肽的化学修饰，PEG修饰技术也从理论走向实际的药物应用。 PEG修饰赋予蛋白质和多肽类优良性能循环半衰期延长免疫原性降低或消失毒副作用减少物理、化学和生物稳定性增强在很大程度上扩宽了蛋白质和多肽的的应用范围。修饰的苷脱氨酶(PEG-ADA)天冬酰胺酶(PEG-L-asparaginase)、干扰素α-ginterferon alfa-2b)、干扰素α-2a(peginterferon alfa-2a)、重组人粒细胞集落刺激因子(pegfilgrastim)传统的PEG随机修饰存在修饰剂呈现多种聚合度、选择性不够高修饰后的分子分布宽、活性降低、稳定性有时不够理想等突出问题相反, 定修饰能够选择基团进行修饰, 避免或减少对活性位点的修饰, 并且较好地控制修饰程度有利于产品质控和工业化生产已成为PEG修饰的。 氨基修饰 在PEG化修饰兴起早期，修饰靶点氨基，包括赖氨酸的ε-NH2和末端的α-NH2氨基是蛋白质或多肽中数量最多的亲核功能基团，而且常常暴露于分子表面，因而较容易与PEG试剂反应。PEG-琥珀酰亚胺琥珀酸酯(PEG-SS)、PEG-琥珀酰亚胺碳酸酯(PEG-SC)、PEG-三氟乙基磺酸酯(PEG tresylate)和PEG-醛(PEG aldehyde)等（见表1）。但以氨基为靶点的PEG化修饰也存在一系列缺陷，如PEG修饰产物同分异构体数量多难以分离纯化获得单一的PEG化产物有药物通过了FDA批准，如PEG-天冬酰氨酶、PEG-ADAPEG-IFN-α等。 近年来，研究者们就以氨基为靶点的定点修饰做了大量研究并开发了一系列较为新颖有效的方法，主要包括、保护剂定点保护与脱保护、氧化去氨基反应及PEG-醛的还原烷化等。 PEGs Linkage chemistries PEG-succinimidyl succinate. PEG-succinimidyl carbonate PEG-tresylate PEG- aldehyde 1.1 定点突变 蛋白质或多肽的氨基修饰包括赖氨酸的ε-NH2和末端的α-NH2Yoshioka等人[利用噬菌体蛋白库表达赖氨酸缺陷的肿瘤坏死因α [mTNF-α-Lys(-)]，即野生肿瘤坏死因子的个赖氨酸均被其他氨基酸只保留末端氨基。mTNF-α-Lys(-)分别与不同不同形状的PEG-N-羟基琥珀酰亚胺反应，制备末端修饰的PEG产物，产物分别经体内抑瘤活性筛选，结果显示为 10的分枝PEG和直链PEG修饰产物，其活性高于未修饰mTNF-α-Lys(-)，可见PEG分子的形状和大小对mTNF-α-Lys(-)修饰产物的活性影响较大10%左右，若将所有的赖氨酸突变掉，很可能会影响蛋白质的生物活性。 1.2保护剂定点保护与脱保护 另外一种定点修饰氨基的方法是基于9-芴甲氧羰基（FMOC）等氨基酸保护剂的定点保护与脱保护作用实现的[~9]。此过程主要分为两步蛋白质的FMOC衍生物与PEG试剂偶联和FMOC的脱保护。如Youn等人[]以鲑降钙素（sCT）的FMOC衍生物FMOC1,11-sCT为原料即该蛋白1位半胱氨酸和11位赖氨酸用FMOC保护，只有18位赖氨酸与PEG试剂具有反应活性，经偶联、脱保护两步定点修饰18位赖氨酸，