苏云金芽胞杆菌芽胞和晶体形成相关功能基因及研究.pdf

摘要 摘 要 苏云金芽胞杆菌(Bacillus 好、对人畜安全、不污染环境等优点而得到广泛应用，约占整个生物农药市场的90％。与芽 胞杆菌属其它种相比，Bt的一个显著特点就是在形成芽胞的同时能够产生杀虫晶体蛋白 (ICPs)。枯草芽胞杆菌作为模式菌株，有关芽胞形成的机制研究相对深入，而针对Bt杀虫晶 体的形成机制的研究还主要集中于杀虫晶体蛋白基因的表达调控，关于晶体和芽胞形成相关 基因关系的报道还很少。因此，本研究通过对功能基因组学相关方法的运用。初步研究了苏 云金芽胞杆菌中分别位于染色体和质粒上的两个基因，并对它们对芽胞和晶体形成的作用加 以阐述，这将有助于阐明Bt芽胞、晶体形成机制，为改造更为安全、高效的工程菌株提供理 论依据。 本研究利用携带Mini．Tn HD73的 lO转座子的plC333温敏载体，完成了B．thuringiensis 转座子突变体库的构建，获得了20，000株具有壮观霉素抗性的突变体，并完成了突变体库的 鉴定。经过筛选，获得两株不能产生芽胞和晶体的突变株。通过对突变株转座子侧翼序列的 分析，确定了插入位点分别位于染色体上删基因和质粒上尚无任何报道的一条基因(命 名为llsc)内部，分别造成了9个碱基的重复，并研究了突变株产生芽胞、晶体的能力。因 进一步构建了敲除copG部分和全部基因载体，分别命名为pRN5101(eopGz△’)及 量较出发菌株少，但突变株依然有产生芽胞和晶体的能力。构建敲除llsc全部基因载体 pRN5 芽胞、晶体的能力。 株表现型结果表明，c印G和llsc基因的缺失不能严重影响芽胞和晶体的形成，不是调控芽 胞和晶体形成的主效基因。相关研究仍需要进一步深入分析转座子Mini-TnlO插入突变在破 坏以上基因的同时还可能影响到其它基因的表达，单独或共同导致了插入突变株完全丧失了 产生芽胞、晶体的能力。 关键词苏云金芽胞杆菌；芽胞；晶体；敲除功能基因；Mini-TnlO Abstract ■■詈曹詈量曩II■皇鼍鼍—●量量詈詈詈皇量詈量皇宣暑皇量蠢鲁鼍■■—鲁皇詈鼍詈暑皇—■曩——●—皇昌詈詈鼍詈詈量詈鲁|置置量墨—量■—置量昌置暑一 functionof and Researchontherelevant genesporulation in’Bacillus1Jaclllus taI format‘10rmation ystal t12uringienststhuring Abstract for90*／0inthe themost Bacillus market,is thuringiensis(Bt)．accountingbiologicalpesticide tohuman animalsandno usedinsecticidalmicriobeforthe and toxin,safetybeings widely high Bacillus Insecticidal tothe withother species，producing pollutionenvironment,ete．Compared