羊种布鲁氏菌M5-90疫苗株bp26基因突变株构建及免疫原性与研究.pdf

中文摘要 布鲁氏菌是一种革兰氏阴性、兼性胞内寄生菌，由其引发的布鲁氏菌病是一种在世 界范围内广泛存在并传播的、以流产和发热为特征的人畜共患传染病。该病对人、畜危 害极大，近年呈现出回升的势头。“检、杀、免”是当前防控、消灭动物布鲁氏菌病的主 要手段。我国自主研制的羊型 M5-90 疫苗因其免疫效果好，可有效预防绵羊和山羊布鲁 氏菌病。但是该疫苗毒力较强，可造成部分怀孕母畜流产，同时无法区分疫苗免疫和自 然感染，从而限制了其在实际中的应用。因此研制一种毒力较弱、具有较好免疫原性， 并能进行鉴别诊断的新型疫苗势在必行。 本研究以羊种布鲁氏菌 M5-90 疫苗株为模板，克隆编码 bp26 部分功能区域序列 EP261 ，EP262 的上下游侧翼序列，采用融合PCR 方法将上下游臂融合，连接 T 载体测 序后，双酶切并与自杀载体 pGEM-7Zf+连接；将克隆的枯草芽孢杆菌 SacB 基因连接至 pGEM-7Zf-bp261 、pGEM-7Zf-bp262 ，然后将构建好的同源重组质粒电转化至布鲁氏菌 感受态细胞中，通过同源重组的方法获得基因突变株 M5-90bp261 和 M5-90bp262 ； 对获得的基因突变株进行 PCR 鉴定和稳定性检测；用布鲁氏菌 M5-90 疫苗株、M5-90 bp