《三种提取苹果绵蚜基因组DNA方法的比较.》.pdfVIP

生物技术通报 · 研 究 报 告 · BloTEcHNoLoGY BULLETIN 2012~g第 1期 三种提取苹果绵蚜基因组DNA方法的比较 武强 吕志创 万方浩 李照会 (中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室，北京 100193； 山东农业大学植物保护学院，泰安 271018) 摘 要： 参考国内外昆虫基因组DNA提取的常用方法，选取KAc法、氯仿一异戊醇法和盐析法3种方法对苹果绵 Eriosoma lanigerum)基因组DNA进行提取。通过基因组DNA直接琼脂糖凝胶电泳、SSR引物扩增产物的琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝 胶电泳检测，对 3种方法所提基因组DNA的质量进行了比较，并综合分析了提取所需时间及所用试剂的毒性大小等。结果表明， 盐析法操作程序较简便快捷，节时省工，可得较好质量的DNA样本，且对试验操作人员无伤害，是一种值得推广应用的基因组 DNA提取方法。 关键词 ： 昆虫 DNA提取 KAc法 氯仿一异戊醇法 盐析法 苹果绵蚜 ComparisonofThreeM ethodsforGenomicDNAExtractionfrom the W oollyAppleAphid WuQiang L0Zhichuang WanF,~shao LiZhaohui (。StateKeyLaboratoryforBiologyofPlantDiseasesandInsectPests，lnstit~eofPlantProtection，ChineseAcademyofAgricuhuralSciences Beijing100193；CollegeofPlantProtectoin，ShandongAgdculturalUniversity，Taian271018) Abstract：ThreemethodstoextractthegenomicDNAofinsectswereimplementedonthewoollyappleaphid(Eriosomalanigerum)． AllthesemethodscanextractgenomicDNAofgoodquality．whicharesuitablefortheSSR·PCRamplification．Comparedwiththechloroform— isoamylmethodandKAcmethod，thesalting—outmethodspendlesstime，andistoxicfreeandeasiertobe,carriedout．Resultshowedthat salting．outmethodisalleasy，rapid，non-toxicandeffectivemethodtoextractgenomicDNAfrominsects． Keywords： Insects DNAisolation KAcmethod Chloroform-isoamylolmethod Salting-outmethod Eriosomalanig~rum 2O世纪80年代PCR技术的完善使分子生物技 深入的认识。 术越来越多地应用于生物的个体生命与代谢过程、 这些研究的第一步也是最关键步骤是获得物种 物种系统发育和进化等方面，成为现代分子生物学 的DNA，并且在一些分子生物学如种群遗传多样性 试验工作的重要基础之一，也促使了诸多分子标记 等研究中通常都需要较大的样本量，所以DNA的提 技术的诞生与应用 …。这些分子标记技术已广泛应 取工作作为分子标记等分子生物学研究的基础，除 用于动植物的相关研究中 1-4]0在昆虫学研究中的 了要保证基因组DNA的高产量、高纯度、结构完整 应用也取得了长足进展，极大地促进了昆虫学的发 之外，更重要的是能够寻求一种步骤简单，耗时少、 展，如RAP