++第七章外源化学物质突变作用..ppt

目 录 碱基置换的后果： 同义突变：虽然有碱基置换的发生，但密码子的意义可以没有改变。 错义突变：所编码的氨基酸不同。 无义突变：如果碱基置换的结果使mRNA上的密码子由氨基酸编码密码子变成非编码的终止密码(UAG、UGA、UAA)，无义突变可使蛋白质合成提前终止，导致基因产物不完全或无功能。 遗传密码-三联子：mRNA上每三个核苷酸翻译成蛋白质多肽上的一个氨基酸。这三个核苷酸叫三联子密码。 （一）碱基损伤 1、直接修复 2、切除修复： 碱基切除修复 核苷酸切除修复 3、误配修复 4、双链断裂修复（耐受） 5、交联修复 1、代谢酶遗传多态性 增强代谢活化或抑制代谢灭活，使某些人对致突变物更敏感。 细胞色素P-450、乙醇脱氢酶、N—乙酰基转移酶、谷胱甘肽S-转移酶等就有明显的遗传多态性。 这些酶的遗传学差异是不同个体间肿瘤易发差异的原因之一。 （二）遗传毒理学试验的目的 1、致突变性的鉴定 2、预测潜在的致癌物以及各种遗传毒物的检测及评价。 （三）成套的观察项目 遗传毒理学评价通常为一组体内、外遗传毒理学试验。为什么选择配套试验？因为： 1）化学毒物的种类和结构多种多样，其致突变机制不同，靶细胞不同（生殖细胞、体细胞）。因此成套观察项目要有两种细胞，除了细胞水平，还要从分子水平检测化学物的遗传毒性; 2）致突变物中仅少数具有直接致突变作用，大多数为间接致突变作用。即需在体内代谢活化后才具有直接致突变作用。体内实验具有完整活化系统，而体外试验则通过加入模拟代谢系统。 3）化学毒物的致突变性有强，也有弱。有的在某一检测系统中是强致突变物，而在另一系统中可能是弱的致突变物。对于弱致突变物在某些系统中容易漏检，即出现假阴性。 选为成套观察项目的原则： 一组可靠的试验系统应包括每一种遗传学终点; 应包括多种进化程度不同的物种;(如原核细胞、低等和高等真核细胞) 体内试验与体外试验配合; 应包括生殖细胞和体细胞; 二、常用的致突变实验 1、细菌回复突变试验(Ames试验) 2、微核试验 3、染色体畸变分析 4、姐妹染色单体交换试验（SCE) 5、果蝇伴性阴性致死试验 6、显性致死试验 7、程序外DNA合成试验 8、单细胞凝胶电泳试验 9、观察方法的新进展 Ames试验常用的测试菌株 S9：指经酶诱导剂处理后制备的肝匀浆，再经9000g离心分离所得的上清液，加上适当的缓冲液和辅助因子。 它主要含有混合功能氧化酶（MFO）是国内常用的体外致突变试验的代谢活化系统。 S9的缺点： 1）随动物种属或器官不同而有差异 2）含有大量亲核物质而可能影响试验的敏感性 Ames试验的优点： 检出率高 灵敏度高 经济适用 由于在测试系统加入了S9，弥补了一般试管内试验的缺点 Ames试验的缺点： 微生物的遗传信息仅相当于哺乳动物的1/6，结构也较简单。 哺乳动物有较微生物完善复杂的DNA修复系统。遗传物质突变后较易修复，且微生物缺乏免疫功能。 对水溶性低物质可出现假阴性 抑菌剂可抑制细菌生长。 微核试验MNT：是观察受试物能否产生微核的试验。 目的：检出DNA断裂剂和非整倍体诱变剂 原理：染色体或染色单体的无着丝点断片或纺锤丝受损伤而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期遗留在细胞质中，末期之后，单独形成一个或几个规则的次核，比主核小，故称微核(Micronucleus)。光学显微镜下可见。 微核判别： 为嗜染性与细胞核相似的圆形或椭圆形小体，一般小于间期核的1/3-1/5。 可存在于各种动、植物细胞中。 传统的微核试验 观察骨髓嗜多染红细胞（PCE）中的微核。属于体内试验。 PCE是指红细胞成熟之前，最后一次分离后数小时将主核排出的细胞，而微核留在细胞质中。 传统微核试验的不足： 有些化合物在骨髓难以达到有效浓度 骨髓PCE是动态平衡 化学毒物主要在肝脏活化，其活化中间产物有可能在达到骨髓之前消失。 将结果外推至其他组织应甚重。 微核试验包括哪些： 哺乳动物微核试验 体外试验：CHL、CHO、V79等仓鼠细胞 蚕豆根尖试验 毛囊微核试验 鱼微核试验 微核可出现于多种细胞中，但在有核细胞中难以与正常核的分叶及核突出物区分，故常计数PCE细胞(未成熟红细胞)中的微核，因为成红细胞发展为红细胞时，主核排出，成为PCE，这些细胞保持其嗜碱性约24小时，然后成为正染红细胞（NCE）,并进入外周血。 （1）转基因小鼠致突变检测系统 （2）微核自动化检测技术 （3）荧光原位杂交技术FISH 观察方法的新进展 （1）转基因小鼠致突变检测系统 转基因动物：是指基因组中整合以实验方法导入的稳定的外源DNA，并能遗传给后代的一类动物。 优点： 可根据需要导入目的基因，即致突变的靶基因； 敏感性高 结果可