07章 锌酶.ppt

碱性磷酸酯酶分子中含有一对Zn2+（相隔～4 ?）和一个Mg2+（与双核锌相距5～7 ?）。两个锌离子中，一个锌离子与两个组氨酸和一个天冬氨酸配位，而另一个锌离子与一个组氨酸和两个天冬氨酸配位。 双核锌单元构成了碱性磷酸酯酶的催化活性位点，直接与底物的末端磷酸根基团结合。碱性磷酸酯酶的底物通常是一个单酯，如硝基苯基磷酸酯。镁离子与三个氨基酸残基和三个水分子配位，它似乎不直接参与催化作用，而只是起到稳定酶结构的作用。 二、核酸酶P1 核酸酶P1是一种含有三个锌离子的糖蛋白，其分子质量约为36000 Da，其中碳水化合物含量大约占17％，酶蛋白部分由270个氨基酸残基组成，富含疏水氨基酸。 核酸酶P1的活性中心存在一个三锌结构，其中两个Zn(II)通过一个天冬氨酸和一个水分子桥联在一起，形成一个双核中心（Zn1、Zn3）。Zn1－Zn3大约相距0.32 nm，而Zn2－Zn1相距0.58 nm，Zn2－Zn3相距0.47 nm。两个水分子（W2和W3）与Zn2配位，一个水分子（W1）桥联Zn1和Zn3。 所有三个Zn(II)在酶中均呈变形的三角双锥五配位构型，其中单核Zn(II)部位（Zn2）为酶的催化活性中心，而双核Zn(II)部位（Zn1、Zn3）为酶的辅助催化中心，起维持结构功能的作用。水分子W2在催化过程中可能起亲核试剂的作用。 三锌活性中心处于核酸酶P1中一个口袋形结构的附近，该结构只允许单链的RNA或DNA进入，所以核酸酶P1只能催化单链的核酸，对碱基没有特异性。 核酸酶P1具有两种酶的活性： 一是磷酸二酯酶活性，作用于RNA或DNA单链中的3’,5’-磷酸二酯键，生成5’,2-核苷酸； 二是3’,2-磷酸单酯酶活性，分解单核苷酸或寡聚核苷酸中的3’,2-磷酸单酯键。 影响核酸酶P1催化活性的因素很多，主要有温度、pH、金属离子和一些有机试剂。总的来说，核酸酶P1的稳定适用范围比较广，是一种热稳定酶，在45～75℃都有催化活性。核酸酶P1的最适合pH因底物而异，一般在pH 5～8都有较强的活性，而且与溶液中的离子种类和离子强度有关。 第五节 锌指蛋白 锌指蛋白是最重要的一类DNA结合蛋白。一般锌指蛋白含有多个结构域，每个结构域由30～50个氨基酸组成，并具有多个半胱氨酸和多个组氨酸残基，它们与锌离子配位形成类似于手指状结构，称为“锌指”结构，含有锌指结构的蛋白称为锌指蛋白。 近20年来，已发现10多种不同种类的锌指结构，约占人类基因产物的1％。锌指蛋白存在于动物、植物和真菌中。锌指结构由多个半胱氨酸和（或）多个组氨酸组成，通过锌离子形成四面体结构。 C为Cys 半胱氨酸 H为His 组氨酸 不同种属中典型锌指的数目和相邻锌指间连接的长度有很大不同。锌指不仅可结合于DNA和RNA，还能与DNA－RNA杂交体和其他锌指蛋白结合，控制生物体中蛋白的转录和翻译过程。 在锌指蛋白中，锌的地位是不可替代的，只有锌指蛋白才具有选择结合核酸的能力，脱锌或用铁、铜、锰、钴、镍等金属离子置换锌离子都将可能丧失其功能。由于锌提供的链间交联以及锌结合位点侧面保守的疏水核使得锌指蛋白能够维持稳定的折叠成螺旋结构体系。锌离子缺乏会导致锌指结构及其生理活性丧失。 一、锌指蛋白的分类与结构特征 根据锌指结构序列和功能的不同可以分为9大类。C2H2型锌指是目前研究最多的锌指结构。 锌指蛋白有不同的分类方法，下图显示的是根据锌指的空间结构不同所分成的8组不同的折叠群。每一个锌指蛋白都应该能够从中找到相应的归类，其中前三个组群包含了大多数的锌指。 二、与DNA、RNA的结合 锌指能识别DNA主要是由于它的三维结构，锌指的DNA结合区域有着与DNA双螺旋结构互补的特殊的表面结构，通常包含一个α螺旋，能够与DNA的主要沟槽相吻合。 * * 第七章 含锌酶和含锌蛋白 锌是生物体中第二丰富的过渡金属，在生物学中的重要性仅次于铁，在生物体内几乎都以Zn2+形式存在。Zn2+具有较强的吸引电子的能力，是强的Lewis酸，可广泛地与蛋白质中的某些氨基酸残基的咪唑氮原子、巯基硫原子、羧基氧原子等配位生成配位数低的键合中心。 在生理条件下，Zn2+不会被氧化或还原，能在生物介质中始终保持二价离子态。与其他金属离子相比，Zn2+的毒性非常低，并且生物体对Zn2+摄入、排出与体内分配的调节机制非常有效，很少出现锌中毒现象。由于锌具有独特的优越性，因此广泛地参与了蛋白质、酶、核酸、糖类、脂类的代谢与基因转录的调控等最基本