78二甲基10（D1核糖醇基）异咯嗪半合成中间体的高效液相色谱分析方法的研究.pdf

摘 要 7，8一二甲基-10一(D一卜核糖醇基)一异咯嗪(核黄素)是生命活动过程不 可缺少的维生素之一，广泛应用于医药、饲料和食品工业等部门，本文对核 黄素半合成中间体的高效液相色谱分析方法作了系统深入的研究，首次建立 了D一葡萄糖发酵液、核糖胺、偶合物和环合物中间体的检测方法，并获得了良 好的结果。主要工作有： 1、建立了D一葡萄糖发酵液的HPLC分析方法 首次采用UV／ELSD检测器，氨基柱，乙睛一水为流动相分析发酵液中D一核糖 含量。其中采用ELSD检测器时，核糖质量一体积浓度在i．5×10～～2．0×10“g／mL 检测器核糖质量一体积浓度在8×10一～l×10‘g／mL，回归方程 在98．I-100．8％之间，RSD在1．3％～1．7％之间，采用外标法测定，最低定量限可 达lu∥ml。 2、建立了核糖胺的HPLC分析方法 采用c，。柱、甲醇一水为流动相、uV检测器，首次分离出三个杂质，分离效 果良好，并通过LC-MS方法，首次确定样品三个杂质的成分。本法对N一(D)一脱 氧核糖醇基一3，4-二甲苯胺(核糖胺)样品定量分析结果为：回归方程 间，RSD在1．1％～I．9％之间，核糖胺与3，4-二甲基苯胺的最小检出限分别为 lug／7ml与0．5ug／ml，后者可检测出的最低残存量可达0．6‰。 3、建立了偶合物的HPLC分析方法 采用c。。柱、甲醇一水为流动相、uV检测器分析偶合物，并通过LC-MS方法， 首次确定了三个杂质的成分。本法对4，5甲基一N一(D)一脱氧核糖醇基一2一偶氮 ug／ml、0．7ug／ml，可检测 物、核糖胺、苯胺三者的定量限分别为2ugfm]、I 出的核糖胺与苯胺最低残存量分别为1．3‰、0．9‰。 4、建立了环合物的HPLC分析方法 采用c。。柱、甲醇一水为流动相、uV检测器，成功地从样品中分离出了五个 杂质，分离效果良好，并通过HPLC-MS方法，首次确定所有杂质的成分。本法 三者的定量限分别为0．5ug／ml、i ug／ml、0．6ug／ml，可检测出的偶台物与巴 比妥酸最低残存量分别为2．5‰、i．5‰。 5、本文测定所涉及的仪器均具有通用性好，操作方法简单，所涉及的试剂 来源有保证，分析时间最长为20分钟。此外，本文建立的核糖胺、偶合物和环 合物的三个高效液相色谱分析方法，除流动相配比和测定波长稍做调整外，其 它条件均相同，应用十分方便。 6、初步研究了核黄素HPLC内标测定方法 本文以核黄素磷酸钠作为内标物，初步研究了核黄索的HPLC内标法测定， 内标物的优点是：保留时间间隔适当，响应值接近，在样品中无干扰成分，纯 品来源有保证。通过与紫外分光光度法的比较，其重现性明显好于后者。 LC-MS分析 Abstract an vitaminin B2)isindispensable 7,8-Dirnethyl·10一(D-1-ribityl)-isoalloxazine(Vnamin food is in and 1IIIideIy medidne，feedp『oduclion．In{h醅pal)ef：,VB2producing things．it qoplied tying fermentandchemical were HPLC。 from analyzed intermediates semi-synthesis by biological for of me