神经干细胞介导HSV-tk%2fGCV系统对颅内恶性肿瘤杀伤作用及研究.pdf

目 录 一、摘要 中文论著摘要……………………………………………………………………·l 英文论著摘要……………………………………………………………………·6 二、英文缩略语………………………………………………………………………13 三、论文一、永生化神经干细胞C17．2介导的HSV-tk／GCV系统对髓母细胞瘤细 胞系Daoy的杀伤作用 嘀ir言………………………………………………………………………………………………………．．114‘ 日U舀………………………………………………………………………………………………………“ 材料与方法………………………………………………………………………14 实验结果……………………………………………………………………………22 讨论………………………………………………………………………………………………………．．29 结论………………………………………………………………………………………………………“32 论文二、全反式维甲酸增强C17．2神经干细胞介导的HSV-tk／GCV系统对胶 质瘤的杀伤作用 前言………………………………………………………………………………………………………”33 刖吾………………………………………………………………………………………………………”jj 材料与方法………………………………………………………………………34 实验结果…………………………………………………………………………36 讨 仑………………………………………………………………………………………………………“39 结论………………………………………………………………………………………………………”41 四、本研究创新性的自我评价………………………………………………………42 五、参考文献…………………………………………………………………………43 六、附录 综述………………………………………………………………………………………………………“49 在学期间科研成绩………………………………………………………………61 致谢………………………………………………………………………………62 个人简介…………………………………………………………………………63 ·中文论著摘要· 神经干细胞介导的HSV-tk／GCV系统对颅内恶性肿瘤 杀伤作用的研究 前言与目的刖吾与曰嗣 由于颅内恶性肿瘤具有侵润性生长的特性，目前治疗手段如手术、放疗、化 疗等难以完全清除侵润到周边正常脑组织中的肿瘤细胞，而正是周边侵润的肿瘤 细胞导致肿瘤的复发，且放化疗副作用大，效果不佳，预后极差。 随着分子生物学的发展，基因治疗已成为人们关注的新的治疗手段，其中单 kinase／ 纯疱疹病毒腺苷激酶／更昔洛韦系统 herpes virus—thymidine simplex 细胞中导入tl【基因，tk基因表达的腺苷激酶可以将无毒的更昔洛韦在肿瘤局部磷 酸化为一磷酸核苷，后者在细胞内激酶作用下转变为二磷酸核昔，再继续磷酸化 为具细胞毒性的三磷酸核苷，抑制多聚酶活性，并竞争性掺入细胞DNA链中，引 起碱基配对错误、断裂，阻碍DNA复制，抑制细胞分裂，最终导致细胞死亡。由 于有毒药物只在肿瘤局部发挥作用，毒副作用小，其临床应用的安全性己得到证 实，但临床实验中对肿瘤的治疗效果并不佳，患者生存期并没得到延长。因为细 胞外的病毒载体只能靠被动扩散，无法移动到离接种点太远的距离，而胶质瘤细 胞能侵袭到很远的区域。 神经干细胞具有向多种颅内恶性肿瘤细胞迁移的特性，是基因治疗的理想载 体。在我们以前的研究中，我们使用原代培养的神经干细胞做载体，介导 HSV-tk／GCV系统对胶质瘤C6细胞做治疗，在体内外实验中均取得了令人鼓舞的 效果。本实验中我们进一步使用永生化的神经干细胞C17．2做载体，研究其对颅 内恶性肿瘤的杀伤作用。与原代培养的干细胞相比，其性质更加均一、稳定，实 验可重复性更强。 在HSV-tk／GCV自杀基因治疗中还存在一种机制，“旁观者效应’’，当给予更 昔洛韦时，导入tk基因的“阳性细胞”周边的未导入tk基因的“阴性细胞”也会 被一同杀死。旁观者效应的存在进一步增强了HSV-tk／GCV系统对肿瘤的杀伤作 用。虽然其具体机制尚不明确，但目前大多认为旁观者效应的物质基础是细胞间 产物通过细胞问的缝隙连接 GJ 到达邻近细胞，引起肿瘤细胞死亡。胶质瘤中最 主要的是Cx43，但在肿瘤细胞中Cx的表达往往较少或者缺失，导致旁观者效应 低下，HSV-tk／GCV系统抗肿瘤效果不佳。本研究中，我们使用全反式维甲酸 a11．transretinoic 用。 材料与方法 一 实验材料 永生化神经干