心血管疾病有关的人血管内皮保护方法用生物标准志物研究.pdf

中文摘要 中文摘要 目的：内皮型一氧化氮合酶(eNOS)抑制剂非对称二甲基精氨酸(ADMA) 是心血管疾病发生的重要危险因素，在冠心病病人血浆中浓度显著升高。我们 内皮功能损伤，并通过相关实验验证。 先天性心脏病(CHD)是新生儿出生缺陷中最常见的一种。血浆蛋白质中可 能存在大量疾病生物标志物。此外，全基因组连锁分析发现同源结构域亮氨酸 拉链编码基因(HOMEZ)与南亚人群CHD易感性相关。我们通过实验鉴定CHD 血浆相关生物标志物并在中国CHD患者HOMEZ基因中筛选潜在的致病突变。 环建立收缩．积累性舒张曲线，．8109MU46619诱导血管收缩，．11至．5109M乙 Blot检测eNOS的表达量。 (100肛M)+AVE3085(309M)孵育血管环。Western 光泽精．增强化学发光法检测超氧阴离子(02．’)的产生量。 (2)应用双向电泳(2．DE)和质谱分析的方法，分析法洛氏四联症(ToF) 患者，室间隔缺损(vSD)患者和健康者相比血浆蛋白质的变化。候选蛋白与 疾病的相关性应用ELISA法进行进一步确认。此外，对400例单纯性VSD患者 和400例健康者进行HOMEZ基因编码外显子突变分析。HOMEZ基因编码外显 子及部分侧翼序列经PCR扩增，ABl3730自动序列分析仪测定序列。CLC 蛋白质结构和功能损伤。 结果：(1)与对照组最大舒张相比(35．3 ACh 4-5．O％)，ADMA孵育后．5109M 相对表达量为0．364-O．03，AVE3085(O．29 4-0．008，P=0．012)可以显著提高由 中文摘要 0．102 4-0．25 RLU／s／mg)，ADMA还可诱导产生过量02．。(2．97 RLU／s／mg)，而 AVE3805可以明显抑制02．‘的产生(0．62士0．104 RLU／s／mg，P0．05)。 法定量。TOF患者血浆Gelsolin浓度(76．30士4．42 与对照组(131．80士23．46 4-0．355 p咖1)相比显著降低。TOF患者(4．930 I_tg／ml， P=0．001，n=40)和VSD患者(5．548 HOMEZ基因2号外显子的两个错义突变被检出(c．116CT．c．630TA)。这两 析中高度保守。变异后的氨基酸疏水性与野生型相比也发生明显变化。蛋白质 结构和功能受到较大影响。 逆转由ADMA导致的IMA内皮功能损伤。这一发现为冠状动脉搭桥术中的内 皮保护开拓了思路，可用于提高搭桥血管的远期通畅率。 (2)我们首次描述了CHD患者血浆蛋白质的变化，其中部分蛋白质的变化 可用于解释CHD患者凝血时间延长，易发生肺部感染等病理改变的机制。此外， 我们在单纯性VSD患者HOMEZ基因编码外显子中检测到了两个错义突变，这 说明HOMEZ基因很可能是中国单纯性VSD患者的一个致病基因。这些蛋白质 和基因均为CHD的重要生物标志物。 关键词：非对称二甲基精氨酸，一氧化氮转录增强剂，双向电泳，质谱，同 源结构域亮氨酸拉链编码基因 Abstract Abstract nitric oxide ob