一种新的双重标记免疫组化图像自动分割方法.pdfVIP

第 32卷 第 2期 电 子 显 微 学 报 Vo1．32．NO．2 2013年 4月 JournalofChineseElectronMicroscopySociety 2013—04 文章编号 ：1000—6281(2013)02—0150-06 一 种新的双重标记免疫组化图像 自动分割方法 孟 军 ，陆 伟 ，王丽珍 ，俞志维 ，郭 妍 ， 程 酩 ，邵志峰 ，季 彤 ，李小卫 (上海交通大学 1．系统生物医学教育部重点实验室，上海 200240； 2．医学院附属第九人民医院，上海 200011) 摘 要 ：本文描述一种 自动分割双重标记免疫组化 图像 的方法 ，此方法直接从双重标记 的两种 阳性组织细胞着色 特征对其进行分离。与常用的彩色反卷积方法相 比，此方法提高 了分割准确度且 需要样品切片的数量从 3张减少 到 l张。通过细胞角蛋 白和 S-100蛋 白双重标记 ，分别经二氨基联苯胺 (DAB)与 3一氨基一9一乙基咔唑 (AEC)显色的 舌鳞癌样品图像 的实验证 明，此方法可 以有效地将鳞癌与神经组织细胞两种不同的染色区域分割 出来 ，与手动分 割的结果作比较其准确度和精确度都有较大的提高。此方法也适用于分割其他用 DAB和 AEC双重染色的免疫组 化 图像 。 关键词 ：图像处理；图像 自动分割 ；免疫组化 图像 中图分类号 ：TP391．41；R392；Q336 文献标识码 ：A doi：10．3969／j．1000—6281．2013．02．010 免疫组织化学 (immunohistochemistry，IHC)技 外 ，在临床研究中，往往需要确定两种组织结构的关 术，是应用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学 系，这就要求将这两种不 同染色的组织结构从 图像 反应使标记抗体的显色剂显色来确定细胞 内抗原 中分割出来。如 Gijtenbeek等在连续切片的双重标 (多肽和蛋 白质)，对其进行定位 、定性及定量研究 记基础上，分割出人体大脑的内覆组织和活跃 的外 的技术 ，是肿瘤病理诊断不可或缺 的手段。对免疫 膜细胞 ，然后进行三维重构 ，成功建立了一种同时观 组化染色的肿瘤样品切片进行成像 ，分析 图像不同 察多种微观立体结构的方法 。 染色区域的特征 ，有助于提高病理诊断的准确性 ，发 目前 ，将两种及以上 的染料从颜色上分离开最 现微小转移灶 ，指导肿瘤 的治疗 。而为了准确分析 常用的方法是彩色反卷积 (colordeconvolution) ， IHC图像各个染色区域的特征 ，图像分割是非常重 它 的原理 是 根据 比尔一朗伯 定 律 (Beer—Lambert 要的一步 ，其结果直接影响后续定量检测 的精度 。 law)，首先对每种抗体用单独的显色剂染色 ，定量出 计算机辅助的图像 自动分割 以其客观性 、准确性和 其对应的显色剂染料的吸收特征向量 ，然后在双重 处理速度快等方面的优势，已成为一种非常重要的 标记 的图像上用 向量正交变换的方法把每种染料的 科研和临床手段 ’。 贡献量化 ，从而把彩色 图像 中代表着不同染料对应 虽然在单种抗体标记 的 IHC图像 的 自动分割 的颜色分离。有学者基于这种方法提出了针对带有 方面 已有很多研究工作 ，但在多重标记 的 IHC图 苏木精复染的IHC图像分割方法 ’ ，与手动分割 像 自动分割问题上，相关 的研究 比较少 。然而如果 结果相比，准确度达到 80％左右 。这一方法需要得 需要在同一张切片上观察两种 目标组织以及研究它 到每种显色剂染料的特征向量 ，因此必须制备额外 们的位置关系，就必须用双重标记的方法