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《CCl4对建鲤肝细胞DNA的毒性作用及对CYP3A基因表达的影响.》.pdf
第 37卷第 1O期 水 产 学 报 Vo1.37.No.10
2013年 10月 J0URNAL OFFISHERIESOFCHINA 0ct..2013
文章编号 :1000—0615(2013)10—1452—08 DOI:10.3724/SP.J.1231.2013.38741
CCI4对建鲤肝细胞 DNA的毒性作用及
对 CYP3A基因表达的影响
曹丽萍 ,贾 睿 ,杜金梁 ,丁炜东 ,殷国俊
(1.中国水产科学研究院淡水渔业研究中心,农业部淡水渔业和种质资源利用重点实验室,江苏 无锡 214081;
2.中国水产科学研究院淡水渔业研究中心,鱼类免疫药理学 国际联合实验室,江苏 无锡 214081)
摘要 :四氯化碳 (CC1)作为一种经典的肝脏毒物,被广泛应用于哺乳动物的肝损伤模型构建及
保肝药物筛选。低、中、高浓度的CCl4-橄榄油溶液(6.25%、12.50%和 15.00%,0.01mL/g)腹腔
注射建鲤72h后,采用单细胞凝胶 电泳和肝组织病理切片技术,测定血清 中肝损伤生化酶来考
察CCI对肝细胞DNA的毒性作用;同时采用实时荧光定量PCR法测定肝组织中CYP3A表达量
的变化。结果显示,6.25%CC1作用建鲤72h后肝组织切片检查没有发生明显的改变,对血清中
酶学指标无显著影响,CYP3A的mRNA表达量与空 白对照组相比也没有显著变化,而彗星实验
结果显示该浓度的CC1作用肝细胞后,尾长、TDNA、尾矩及Olive尾矩等DNA损伤指标与对照
组相比,显著增大;随着CC1作用浓度的增加,肝细胞肿胀、广泛空泡变性,出现核 固缩和核溶解
等组织学的变化,12.50%和 15.00% CC1均能显著引起血清中谷丙转氨酶(Girl?)和谷草转氨酶
(GOT)水平升高,15.00% CC1能显著促进乳酸脱氢酶 (LDH)和丙二醛 (MDA)大量生成;彗星
实验中各项损伤指标也随着染毒剂量增加而极显著增大;同时,12.50%和 15.00% CC1组的
CYP3AmRNA表达量显著降低。结果表明,CC1对建鲤肝细胞DNA具有毒性作用,在实验的浓
度范围内,CC1能抑制 CYP3AmRNA表达 ;随着CC1作用浓度的增大,血清酶、病理切片和彗星
实验结果表现出剂量效应,并有一定的一致性,彗星实验表现出更高的灵敏性。
关键词 :建鲤;四氯化碳 ;CYP3A;彗星实验
中图分类号 :Q785;S917.4 文献标志码:A
四氯化碳 (CCI)是一种 已知的具有肝毒性 结构被破坏 ,在裂解液的作用下促使 DNA变性
的化合物,使得动物肝脏出现类似于人类急性肝 和解螺旋。在 电场作用下,单链和双链 DNA 片
炎的症状特征 ,常应用于构建动物的肝损伤模型, 段 向阳极迁移 ,而核 DNA分子 由于分子量太大
其损伤机制与其在体内代谢过程中产生大量的活 留在原位。经荧光染色后 ,在荧光显微镜下可见
性氧密切相关… ,能导致 DNA单 、双链断裂和其 形似彗星的外观 。如今在分子毒理学研究领
他一些形式 的染色体损伤。DNA损伤是评价环 域 ,彗星实验被认为是检测各种环境污染物诱导
境毒物遗传毒性 的一个重要参数 。20世纪 80年 生物体 DNA损伤程度 的一个极其敏感 的方
代末发展起来 的单细胞凝胶 电泳 (singlecellgel 法 ,有关鱼类细胞 彗星实验 国 内报道并不
electrophoresis,SCGE),又称 彗 星实 验 (comet 多见。
assay),可在单个细胞水平上检测 DNA损伤和修 研究表 明,氧化应激相关基 因一细胞色素
复,还可 以用来检测各种细胞的遗传损伤。其技 P450酶系(CYP450)在CC1肝损伤发生过程 中起
术原理主要是 :细
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